IGF2在小鼠胚胎干细胞定向分化为胰岛样细胞过程中的表达.pdfVIP

天津医药2013年11月第41卷第 11期 iln doi：10．3969／j．issn．0253—9896．2013．11．021 IGF2在小鼠胚胎干细胞定向分化为胰岛样 细胞过程中的表达 刘 峰 汤佳珍 朱凌燕 甘华侠 摘【要】 目的 观察印迹基因胰岛素样生长因子(IGF)2在小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为胰岛样细胞过程中 的表达情况。方法 体外诱导胚胎干细胞向胰岛样细胞分化，逆转录一PCR(RT—PCR)和细胞免疫荧光检测胰岛细 胞标志基因表达；聚合酶链式反应一限制性内切酶片段长度多态性(PCR—RFLP)检测印迹基因IGF2在诱导分化前后 细胞 中的亲本表达情况。结果 诱导分化终末细胞能表达胰岛素、胰高糖素及C肽等胰岛细胞特异性标志物，PCR— RFLP检测分析显示 ，体外诱导分化的细胞的印迹基因IGF2呈双等位基因表达，印迹丢失。结论 体外诱导培养可 导致胚胎干细胞印迹基因IGF2表达的改变。 关【键词】 胚胎干细胞；基因组印迹；胰岛素样生长因子 Ⅱ；等位基因；细胞分化 TheExpressionofIGF2inMouseEmbryonicStem CellstoDifferentiateintoIslet-LikeCells LIU Feng，TANGJiazhen，ZHULingyan，GAN Huaxia DepartmentofEndocrinology,TheAffiliatedHospitalofNanchangUniversity，Nanchang33ooo~China A【bstract】 0bjective Toobservetheeffectsofinsulin—likegrowthfactor一2(IGF2)inthecourseofmouseembryon— icstem cellsinducedtodifferentiateintoislet—likecells．M ethods MouseEScellswereinducedtodifferentiateintoislet— likecellsinvitro．TheexpressionofisletspecificmarkerswastestedbyRT—PCRandimmunofluorescenceassay．RT—PCR／ RFLPwasusedtotesttheimprintedgenesIGF2parentalexpressionincellsatdifferentstages．Results Isletspecificmark— erswereexpressedindifferentiatedcells，suchasinsulin，glucagonandC—peptide．PCR—RFLPshowedthatimprintedgenes IGF2derivedfrom embryonicstemcellswerebiallelicexpressionandlossofimprinting．Conclusion Geneimprintingsta— tusofIGF2waschangedindifferentiatedcellsinvitro． K【eywords】 embryonicstemcells；genomicimprinting；insulin—likegrowthfactorII；alleles；celldifferentiation 胚胎干细胞 (embryonicstemcells，ES细胞)具有 1 材料与方法 无限增殖和全能分化的潜力，理论上ES细胞具有分 1．1 材料 小 鼠ES细胞系由美 国斯坦福大学Andrew．R． 化为各种细胞的潜能 】，目前已成功将ES细胞诱导 Hoffman惠赠。试剂 ：Knock—outDMEM、DMEMF／12、L一谷氨 分化为多种终末组织细胞，成为细胞和器官移植领 酰氨 、胎牛血清 (FBS)和TRIzol购 自Invitrogen公司，白血病