人血管瘤裸小鼠移植模型形态学动态观察1.PDFVIP

人血管瘤裸小鼠移植模型形态学动态观察1 唐耘熳，刘文英，俞松，彭强，王勇，熊忠讯，王永刚，魏艇 四川大学华西医院小儿外科 成都 610041 E-mail ：tangyunman@126.com 摘 要：目的 建立人血管瘤裸小鼠异种移植模型并动态观察移植物形态学变化。 方法 将人婴幼儿血管瘤组织切分为 96 个小块移植于 16 只裸小鼠皮下，定期测量瘤体体积，取不 同时期移植瘤作HE 染色和抗人 CD31 免疫荧光标记。 结果 移植瘤大部分 （81/96）存活， 在移植后 1~2 个月期间体积明显增大，继而缓慢缩小。组织学观察显示移植瘤早期出现缺血 改变，瘤性内皮细胞坏死、间质纤维化，约在移植后 1 个月出现瘤细胞增生，血管瘤增长， 继而瘤内血管扩张，瘤性内皮细胞逐渐减少，血管瘤消退，代以纤维脂肪组织。 结论 将 快速生长的人血管瘤组织移植于裸小鼠体内，移植瘤可存活，其缺血期后生长模式与人血管 瘤自然发展过程相似。 关键词：血管瘤；裸鼠；动物模型；形态学 1．引言 婴幼儿血管瘤 （常简称血管瘤）是小儿最常见的肿瘤，为血管内皮细胞增殖所形成的良 性肿瘤。其病因和病理机制不清，而目前缺乏一种较为理想的研究模型。本研究将人体血管 瘤移植到免疫缺陷的裸小鼠体内，建立起异种移植模型，并观察移植瘤的生长情况和形态学 变化，报告如下。 2．材料与方法 2.1 血管瘤来源：血管瘤取自一 2 月龄男婴左腰部皮肤-皮下血管瘤，因生长快速， 家长要求手术切除。病理检查显示为典型增殖期婴幼儿血管瘤。将血管瘤皮下部分修剪为 5mm×4mm×3mm 待用。 2．2 实验动物：BALB/c nu/nu 裸小鼠 16 只，鼠龄 5-6 周，雌雄不拘，体重 20 克左 右。 1本课题得到教育部博士点基金资助（编号：200220610068 ） -1- 2.3 手术方法：超净工作台上，2.5%戊巴比妥钠 45mg/kg 体重腹腔注射麻醉裸小鼠 后，经皮肤切口将血管瘤组织块移植于裸小鼠颈背部、腰背部、双侧胸壁和腰侧部皮下，每 只 6 块。于标本离体后 1 小时内完成。 2.4 大体观察：移植后肉眼观察并扪摸皮下移植物。每月四次以游标卡尺测量移植 物最大直径a及横径b，根据公式V=π/6×a×b2 [1] 估算移植瘤体积 。 2.5 光镜观察：移植后 2、3、5、7、15、30、45 天，2、3、4、5、6 个月各切取移 植瘤 3 个，10%中性福尔马林固定、石蜡包埋、切片后常规 HE 染色，光镜下观察。 2.6 免疫荧光标记：一抗为小鼠抗人CD31 单克隆抗体（中山公司，北京），工作浓 度 1：100，二抗为四甲基异硫氰酸罗丹明标记山羊抗小鼠Ig抗体 （Eugene，美国）。石蜡切 0 片脱蜡、水化、3%过氧化氢处理后，高压抗原修复、非免疫动物血清处理，加一抗过夜 （4 C）， 次日加荧光二抗孵 1 小时后 10%缓冲甘油封片，多光子激光共聚焦显微镜下观察。 3．结果 3.1 动物存活状况：除一只荷瘤裸小鼠在移植后 5 个月出现濒死征象被处死外，其 他裸小鼠存活良好，移植后 6 个月终止试验，处死动物并取移植瘤。 3.2 移植瘤大体观和体积：移植瘤体积变化见图 1。供移植的血管瘤组织切分后呈 浅紫红色或苍白，植入裸小鼠皮下后外观呈粉红色，与宿主皮肤相近，扪之柔软。整个观察 期间移植瘤与宿主组织分界清楚，有包膜样结构形成。移植后 1 个月内 13 个移植瘤缩小、