临床肝素类药物酶解分析二糖组成-分析化学.PDFVIP

第43卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第7期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015年7月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 964 ~970 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.150032 临床肝素类药物酶解分析二糖组成 1 2 1 1 *1 韩章润摇 邢新会摇 于广利摇 曾洋洋摇 张丽娟 1(中国海洋大学医药学院,海洋药物教育部重点实验室,山东省糖科学与糖工程重点实验室,青岛266003) 2(清华大学化学工程系工业生物催化教育部重点实验室,生物化工研究所,北京 100084) 摘摇 要摇 肝素是一类结构复杂的高分子糖类,以N鄄硫酸、6鄄O硫酸氨基葡萄糖和2鄄O硫酸艾杜糖醛酸为主要 成分组成二糖。 常见的肝素注射液是以未分级肝素为原料纯化灭菌制备而来,在临床上使用更为广泛的是将 肝素降解得到的低分子片段,低分子肝素保留了肝素糖链基本结构,但是不同制备工艺导致其具有不同的还 原及非还原端。 本研究以肝素类药物为研究对象,使用肝素裂解酶 玉, 域及芋将肝素注射液、低分子肝素注 射液(达肝素、那屈肝素、依诺肝素)、化学合成的类肝素(磺达肝素)进行酶催化降解产生二糖,结合强阴离子 交换色谱(Stronganionexchangehighperformanceliquidchromatography,SAX鄄HPLC)以及紫外检测器在线分析, 使用市售肝素二糖标准品确定各种二糖结构。 此外,使用反向离子对色谱和电喷雾质谱联用分析磺达肝素 中的甲基二糖以及达肝素和那屈肝素中的脱氨二糖结构,为肝素以及类肝素药物的质量控制提供更为精确 的结构信息。 关键词摇 肝素;低分子肝素;肝素裂解酶;二糖分析;质谱 1摇 引摇 言 肝素不仅是临床上无可取代的经典抗凝剂,还是抗血栓形成、治疗心血管,脑血管疾病的首选药 [1,2] 物 。 原料肝素是提取畜牧类产品的副产物(猪或牛的肠黏膜中)得到的一种磺化程度较高的糖胺聚 糖。 肝素注射液是在原料肝素基础上,经过严格纯化手段除去蛋白、非肝素糖胺聚糖、病毒等杂质后,按 照其抗凝血酶活性为单位灌装得到的一种药物。 通过降解纯化原料得到的低分子肝素具有出血概率 [3] 低、用药时无需监测部分活化的凝血酶时间等优点。 目前,市场上广泛使用的低分子肝素 及其制备 方法有:(1)依诺肝素(Enoxaparin)是将原料肝素苄酯消除降解制备而来;(2)达肝素(Dalteparin)是由 亚硝酸降解原料肝素制备;(3)那屈肝素(Nadroparin)是亚硝酸降解然后将钠盐置换为钙盐形式的低 分子肝素;(4)还有一类是模拟肝素抗凝血酶最小单位五糖的化学全合成药物肝素五糖(Fondaparinux Sodium)。 作为一类与生命息息相关的药物及其本身结构复杂分析困难,肝素的质量控制显得尤为重要。 [4,5] 2008年发生的肝素原料污染事件更是以149例死亡人数震惊了医药界 。 美国和欧洲药典在肝素事 [6,7] 1 件之后重新编写了肝素原料的内容 ,在常规的效价、吸光度测定外,引入了核磁共振( H鄄NMR)及离 子交换色谱来鉴别肝素中是否存在硫酸软骨素及硫酸皮肤素,有效杜绝了其它天然或是化学修饰糖胺 聚糖污染。 中国药典暂