2016 沈平第六章.pptVIP

第六章 微生物的生长繁殖及其控制 生长（Growth）？ 繁殖（Reproduction）？ 生长 生物个体由小到大的增长，即表现为细胞组分与结构在量方面的增加 繁殖 指生物个体数目的增加 Growth Reproduction In Bacteriology, growth is defined as an increase in the number of cells. 第一节、细菌的个体生长 Steps in binary fission of a rod-shaped bacterium. 二分裂 ( Binary Fission ) 思考：细胞壁的扩增？ 生长周期（Growth cycle） 代时（Generation time)：在细菌的个体生长中，每个细菌分裂繁殖一代所需要的时间 遗传学特性（ Inheritance ） 营养条件（Nutrition） 影响因素： 如何协调细菌的分裂和生长？ 第二节 微生物生长的测定 微生物生长测定的意义 微生物生长测定的方法 计数法 重量法 生理指标法 微生物生长测定的意义 客观反映微生物生长的规律。 客观评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响。 评价不同的抗菌物质对微生物抑制作用的效果 微生物生长测定的方法 微生物生长测量方法 个体计数法 重 量 法 生理指标法 缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 1、计数法 （1）直接计数 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 1 mL=103 mm3 1个小格体积＝0.1 mm3/400 1mL=4×106（小格体积） （2）间接计数法——平板计数 CFU （2）间接计数法——膜过滤培养法 （2）间接计数法——比浊法 还有ATP荧光法等 2、重量法 微生物培养 液体培养 过滤或者离心 直接称重 烘干称重 固体培养 融化培养基 湿重 干重 （1） 测细胞干重：一般干重为湿重的20-25%。收集单位体积培养液中菌体，干燥器内加热或减压干燥，直接用仪器测定。 （2） 测细胞含N量确定细胞浓度： 凯氏定氮法测N，总蛋白含量=含N量%×6.25 （3） 通过DNA测定计算浓度： 荧光法，每个菌平均含DNA 8.4×10-5ng 3、生理指标法 微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、生物热等与其群体的规模成正相关。 样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显，因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热计等设备来测定相应的指标。 第三节、细菌的群体生长繁殖 （Population growth) 微生物生长分个体生长和群体生长。培养方法有分批培养和连续培养。 分批培养 分批培养是在一个封闭的、有一定体积的液体培养基的容器中接种少量细菌在特定条件下进行培养。在分批培养中微生物只完成一次生长循环。 一、细菌的群体生长规律 细菌的生长曲线： 将少量细菌接种到一定体积的新鲜液体培养基中进行分批培养，定时取样，以细菌数目的对数为纵坐标，培养时间为横坐标，可绘制出细菌的生长曲线。 一、细菌的群体生长规律 停滞期 生长曲线可分： 对数期 静止期 衰亡期 1、停滞期（迟滞期或适应期）（lag phase）: 将细菌接种到某一培养基后，细菌并不立即繁殖而是经过一段适应期才能生长繁殖。调整适应表现在合成多种酶、完善体内的酶系统及其他细胞成分。 特点： （1）细胞质均匀 （2）代谢活力强 （3）蛋白质和RNA含量增加 （4）体积显著增加，许多杆菌可长成长丝状 （5）对环境变化敏感 影响因素： （1）接种量。接种量大，停滞期可缩短 （2）菌龄。菌种年轻，对数生长期接种，停滞期可能很短甚至不明显 （3）营养。如果种子培养基与新接种的培养基成分相同，则对菌生长有利。从丰富培养基转入贫营养基，停滞时间拉长，反之减少； （4）菌种特性。大肠杆菌停滞期长，分枝杆菌长 2、对数期（指数期）log phase 细菌生长速度达到最大，数量以几何级数增加。 特点： （1）细菌迅速分裂，菌数按几何级数增加； （2）世代时间最短，而且恒定； （3）生长速度最高而且恒定； （4）代谢活力强无死亡； （5）菌体整齐，体积恢复到原来大小； （6）对环境敏感，生理性状及菌体成分较一致 3、稳定生长期 stationary phase 由于营养消耗，供应不足及代谢产物的积累，这时一部分菌死亡，细菌分裂增殖的数量等于菌体死亡的数量，细