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* 实验 叶绿素的提取和分离 四 班 王赫男 实验目的 1、进行绿叶中色素的提取和分离 2、探究绿叶中含有几种色素 实验原理 1、绿叶中的各种色素能溶于有机溶剂(无水乙醇或丙酮)中，而不溶于水，从而使色素从生物组织中脱离出来。 2、各种色素在层析液中的溶解度不同，所以层析液在滤纸上扩散速度也不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢。 实验材料： 新鲜的绿叶（如菠菜的绿叶） 用具： 干燥的定性滤纸，试管，研钵，玻璃漏斗，毛细吸管，剪刀，尼龙布，量筒（10mL),天平。 无水乙醇，层析液，二氧化硅， 碳酸钙。 新鲜的绿叶 含有丰富的色素，便于提取 层析液： 由20份在60-90℃下奋力出来的石油醚，2份丙酮和2份苯混合而成。 （也可用93号汽油代替。） 二氧化硅和碳酸钙的作用： 二氧化硅：研磨充分 碳酸钙：防止研磨中色素被破坏 实验步骤 1、提取绿叶中的色素 （1）5g绿叶，剪碎，放入研钵 （2）绿叶+二氧化硅（少）+碳酸钙（少）+10mL无水乙醇 （溶解色素） （3）研磨液迅速倒入漏斗中（基部放一单层尼龙布）过滤， 将滤液收集到试管，用棉塞将试管口塞严。 迅速、充分研磨 迅速、充分研磨 叶绿素不稳定，易被活细胞内的叶绿素酶水解。 充分研磨使叶绿体完全破裂，提取较多的色素。 2、制备滤纸条 将干燥的定性滤纸剪成略小于试管长度与直径的滤纸条 1cm 将滤纸条的一端去两角，并在距这端1cm处用铅笔画一条细的横线。 3、画滤液细线 用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线 均匀的画出一条细线，待滤液干后再重复画2-3次。 均匀的细线、重复2-3次 滤液细线要求细、直：为了使色素带分离清晰，不易重叠。 重复2-3次：使细线上含有较多的色素。 4、分离绿叶中的色素 将适量的层析液倒入试管中（也可以用小烧杯和培养皿代替试管），将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）轻轻插入层析液中，随后用棉塞塞紧试管口（丙酮有毒，防止挥发）， 注意：不能让滤液细线触及层析液。 为什么不能让滤液细线触及层析液 防止色素溶解到层析液中，滤纸条上得不到色素带。 5、观察与记录 几分钟后，取出滤纸条，干燥并观察每条色素带的颜色。 记录结果。 6、实验结果 滤纸条上会出现四条宽度、颜色不同的色素带 最细、最快 最粗 最慢 胡萝卜素（橙黄色） 叶黄素（黄色） 叶绿素a（蓝绿色） 叶绿素b（黄绿色） *