LightCycler480系统操作快速指南_new_1.6.docVIP

目录 说明及版本历史 仪器基本操作 LightCycler? 480实时定量PCR仪外观 启动系统 样本准备 基本界面及图标 Overview界面 New Experiment 界面 Navigator 界面 定量PCR实验设置与结果分析 启动系统 运行一次PCR实验 PCR程序的设定 多孔板分区的编辑 样本信息编辑 程序的运行 实验结果分析 绝对定量分析 相对定量分析 Tm calling 28 基因分型分析 结果报告 数据管理及操作简化 已存数据的处理：查看、导入与导出 应用Template和Macros简化实验流程 用户管理 日常维护 说明 本指南用于简要说明LightCycler? 480 系统软件1.5版的界面及操作要点，对初学者了解系统软件有所帮助。对于1.2/1.3版的用户，请向罗氏应用科学部索取相关版本的中文快速操作指南。荧光定量PCR是一种相对较为复杂和精确的核酸定量及遗传突变分析方法，要求使用者对仪器、软件和实验设计有比较系统深入的了解，方能对实验的设计、操作及分析运用自如。因此请各位使用者在通过本指南初步了解本软件的操作要点、熟悉仪器基本操作后，尽快通过阅读完整的操作手册、罗氏应用科学部发布的Technical Notes、《Real Time PCR Application Manual》及各专业领域的科学家们发表的文献，熟悉系统相关软件和实验设计、分析。 版本历史 版本号 修订时间 1.0 2007-3-27 1.2 2007-8-22 1.21 2008-8-15 1.5 2010-8-13 2011-1-19 A 仪器基本操作 LightCycler? 480实时定量PCR仪外观 前视图：左、右状态指示灯及多孔板托架弹出/缩回按钮 后视图：主电源开关、电源插座、空气过滤装置及LAN网线接口 轻按多孔板托架弹出按钮，托架即可弹出，再按一次按钮，托架即收回 启动系统 启动主机电源； 左状态指示灯 右状态指示灯 仪器状态 橘 *闪烁* 橘 *闪烁* 正在初始化 绿 橘 机器启动完成, 96/384孔板还未放入 绿 橘 *闪烁* 96/384 孔板托架正在收回 绿 绿 机器启动完成, 96/384 孔板已经放入 绿 *闪烁* 绿 *闪烁* 实验进行中 仪器自动初始化的过程，多孔板托架会自动弹出并复位。此前若有上次实验的多孔板在多孔板托架上未取出，则托架会保持弹出状态，直至操作人员取下多孔板，按下仪器上的托架弹出/缩回按钮，将托架缩回仪器内，仪器才会继续自检过程。 启动电脑； 使用正确的用户名和密码登录Windows XP系统； 权限 用户名 密码 管理员 LCinstall LCinstall 操作员 Operator LC480 双击图标 ，打开LightCycler? 480 软件，输入用户名、密码后登陆。 权限 用户名 密码 管理员 admin LightCycler480 样本准备 以下描述的过程仅为一个代表性的例子，用户应结合自身实际情况采用合适的方法（如可以将已加入模板DNA的反应预混液分装到多孔板上）。 编辑PCR程序，输入样本数量、名称等信息。细节见C. 2 在1.5 ml或0.5 ml反应管中制备含有除DNA或RNA模板以外的所有试剂的反应预混液； 将反应预混液加入LightCycler? 480多孔板的反应孔中。处理大量样本时最好使用自动加样系统或多道移液器（8道或16道）； 制备流程应严格按照所用试剂盒的说明书进行。反应体系体积应小于所用PCR多孔板的容积上限。配制反应预混液时最好使用黑色反应管或带锡箔包裹的反应管，以防止环境光源对荧光染料的漂白。 将DNA或RNA模板加入反应孔中； 用压膜刮板将LightCycler? 480封板膜牢固地压贴到多孔板表面； 封膜主要是为了防止高温时反应液的蒸发。操作时绝对不可用未带手套的手去接触多孔板上表面或封板膜，因为手上常带有RNA酶（会降解RNA模板）、蛋白质、油脂（会在光源激发下发出荧光）等影响实验的污染物。 压膜时切忌用力过猛、过快，以防多孔板弹起，导致反应液溅到贴好的膜上，影响实验准确性。 将多孔板放到板式离心机上，用同样的一块多孔板进行配重平衡后，1,500g离心2分钟。检查孔内有无气泡，若有，再重复离心； 由于孔径很小，384孔板加样结束后必须用板式离心机进行离心除气泡，并确保反应液汇集在孔底部。对于96孔板，若加样时注意将移液头接触反应孔底部，而非孔壁，防止气泡产生，同时经观察，确定孔