内皮脂肪酶启动子—384A-C多态性和急性冠脉综合征和血脂相关性.docVIP

内皮脂肪酶启动子—384A/C多态性和急性冠脉综合征和血脂相关性 　　多项研究表明，环境和遗传[1-3]因素共同参与急性冠脉综合征（acute coronary syndrome， ACS）的发生和发展。 内皮脂肪酶（endothelial lipase， EL）的基因多态性与冠心病（coronary heart disease， CHD）关系密切[4-5]。Yamakawa-Kobayashi[6]和Hutter等[7]发现EL启动子区-384A/C基因多态性（rs3813082）与血浆HDL水平相关，并且可能增加人群心血管疾病的患病风险。但是到目前为止，EL-384A/C基因多态性是否与中国苏南地区汉族人群ACS发病存在相关性尚未见报到。本研究旨在通过采用PCR-RFLP方法了解中国苏南地区汉族人群EL-384A/C基因多态性频率分布，并探讨其与ACS之间的关系。 1 资料与方法 1.1 一般资料 2008年8月至2011年1月在江苏大学附属武进人民医院心内科住院的ACS患者320例，其中男201例，女119例，年龄60～88岁，（61.44±11.15）岁，ACS定义按照美国心脏病学会/美国心脏协会标准[8]，患者均行冠脉造影检查，结果由两名有经验的心导管室医师判断。对照组为315例同期住院并经冠脉造影检查排除冠心病者（心外膜下冠状动脉或其主要分支狭窄50%分别记为1支病变，左主干病变记为2支病变。 1.2.4 采用标准酚氯法提取患者外周血基因组DNA，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism analysis，PCR-RFLP） 方法检查EL-384A/C基因型。参照Yamakawa-Kobayashi[5]的文献合成引物，上游引物5’-TAG CTC CGC CGG GTT ATT GTG C-3’，下游引物5’-CCA GAT CCT CCT CTC CCC ACT G-3’，引物由大连宝生物有限公司合成。总PCR反应体系50 μL，包括1 ul基因组DNA，5 μL 10×PCR Ex Taq Buffer （Mg2+）， 4 μL dNTP Mixture，0.25 μL TaKaRa Ex Taq， 上下游引物各1 μL，去离子水补充至50 μL。PCR扩增条件：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性45 s，66 ℃退火45 s，72 ℃延伸45 s，共40个循环，最后72 ℃延伸10 min。PCR产物经限制性内切酶Hha I （由大连宝生物有限公司提供）酶切37.0 ℃水浴过夜。酶切产物经胶红染色的3%琼脂糖凝胶100 V电泳45 min，紫外灯下观察分型。约10%左右样本被随机重复检查。为证实笔者的结果，部分PCR产物送上海生工行基因测序。 1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间均数比较采用独立样本t检验；计数资料比较采用χ2检验。基因多态性与ACS的多因素相关分析采用Logistic回归分析。以P0.05），具有群体代表性。ACS组AA、AC、CC基因型和A、C等位基因分布频率分别为250（78.1%）、62（19.4%）、8（2.5%）和87.8%、12.2%；对照组AA、AC、CC基因型和A、C等位基因分布频率分别为219（69.5%）、90（28.6%）、6（1.9%）和83.8%、16.2%；由于CC基因型数量较少，笔者把AC+CC基因型合并为C等位基因携带者进行统计分析，两组间基因型及等位基因频率分布差异均有统计学意义，见表2。 EL-384A/C不同基因型间血脂水平及血脂比值比较，与AA基因型比较，C等位基因携带者（AC+CC）HDL、ApoA-I水平明显较高[HDL：（1.20±0.35 ）mmol/L vs.（1.11±0.29） mmol/L，P=0.001；ApoA-I：（1.14±0.25） g/L vs. （1.08±0.21）g/L，P=0.009]，见表3。 EL-384A/C基因多态性与冠脉病变支数，不同基因型间冠脉病变支数差异无统计学意义，见表4。ACS危险因素Logistic回归分析，将基因型、性别、年龄、糖尿病、高血压、吸烟和血脂纳入回归模型进行分析，结果显示在校正性别、年龄等ACS危险因素后，EL-384A/C基因多态性仍然与ACS有明显相关性（P=0.042，OR=0.682，95%CI=0.472～0.986），见表5。3 讨论 　　1999年Hirata等[9]首次采用消减杂交技术在体外培养的人脐静脉内