荧光定量PCR原理及实验步骤.docVIP

下载本文档

149
0
约小于1千字
约 4页
2017-12-20 发布于江西
举报
版权申诉

荧光定量PCR原理及实验步骤.doc

1、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

荧光定量PCR原理及实验步骤

荧光定量PCR原理及实验步骤一、实时荧光定量PCR原理常规PCR技术对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测。实时定量PCR技术在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析扩增曲线：荧光阈值：Ct值：标准曲线SYBR Green工作原理： 1、SYBR Green? 能结合到双链DNA的小沟部位 2、SYBR Green? 只有和双链DNA结合后才发荧光 3、变性时，DNA双链分开，无荧光 4、复性和延伸时，形成双链DNA， SYBR Green 发荧光，在此阶段采集荧光信号。二、实验步骤 1. 实验前先在大型仪器共享平台上预约多元荧光定量PCR仪。将所需引物和SYBgreen（避光）拿出，解冻。计算好所有引物和SYBgreen的用量。反应体系（25μL）如下： H2O 11μL SYBgreen 12.5Μl 上游引物 0.25μL 下游引物 0.25μL cDNA 1μL 可先将H2O 和SYBgreen按照所需量配好后，分装，再根据需要加引物和模板。 4、加完所有试剂后，盖上盖子，混匀，离心。上机。