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BRCA1基因启动子甲基化状态与新疆维吾尔族乳腺癌的关系的研究申报人：吴涛乳腺外科 汇报内容 一、立题依据 二、研究目标 三、研究方法、年度进展安排 四、技术路线 五、可行性分析 六、本研究课题的创新之处 七、预期研究结果 八、经费预算 一、立题依据 乳腺癌是严重危害女性健康的恶性肿瘤，已居于各种 恶性肿瘤发病率第二位,病死率居第五位。其中散发性 乳腺癌占90%-95%，遗传性乳腺癌占5%-10%。 新疆乳腺癌发病率逐年上升，与汉族相比，维吾尔族 乳腺癌病变有其自身明显的特点，如发病年龄晚10年、 淋巴结转移率高等特点。 表观遗传学是指基于非基因序列改变所致基因表达水 平变化 ，如DNA 甲基化，特别是CpG岛甲基化所致 抑癌基因转录失活问 题，与肿瘤疾病的发生关系密切。 一、立题依据 1、BRCA1是抑癌基因，是DNA损伤监测点的调节蛋白，参与 损伤DNA的同源重组修复，通过修复受损的DNA，保证基 因组的稳定。 2、基因启动子的高甲基化是许多抑癌基因失活导致细胞恶 性转化的重要步骤。 3、前期工作发现遗传性乳腺癌的BRCA1基因序列大多数正 常，但BRCA1蛋白表达异常。提示可能是DNA 启动子 甲基化所致。 二、研究目标 1、通过流行病学调查，探讨新疆维吾尔族乳腺癌的相 关危险因素； 2、研究遗传易感基因BRCA1基因启动子甲基化状态，对 比分析新疆维吾尔族乳腺癌及良性肿块中表达的关系； 3、初步探讨分析遗传易感基因BRCA1基因启动子甲基化 在乳腺癌病因学与发病学中的意义及其作用机理； 1、研究方法：1：1病例对照研究方法 研究对象的选择：病例组、对照组 样本含量计算：运用两样本均数的比较，同时与两样本率的估算相结 合，依据前期实验研究所得实验数据，并结合文献 相关资料，按α=0.05，β=0.10，经统计教研室估 算约需病例组、对照组各60例。 流行病学调查：设计问卷，内容包括一般项目，月经初潮年龄及停 经年龄、哺乳史、绝经后是否用雌激素替代疗法及 肿瘤家族史以及与环境（生活、饮食习惯）相关的 主要或潜在的危险因素，对病例组及对照组进行调查。 三、研究方法 2、组织标本的收集、实验步骤 收集组织 DNA抽提 DNA 样品的亚硫酸氢盐修饰 酶切法测定靶序列的甲基化状态 甲基化特异性PCR 高效液相色谱（DHPLC）法测定靶序列的甲基化状态 三、研究方法 3、统计学分析方法 使用Epidata建立数据库，用SPSS16.0进行统计分析，率的比较用 χ2检验； BRCA1基因甲基化状态与乳腺癌临床病理特征、危险因素 的关系采用Spearman相关分析法,检验水准α=0.05。 2012年01月－2012年12月 （1）收集实验所需的标本（60例）及相关临床资料。 （2）订购本实验所需耗材、试剂及试剂盒。 （3）组织项目具体实施人员进行实验研究。 2013年01月－2013年12月 （1） 组织项目具体实施人员进行实验研究。 （2） 分析、总结实验结果，撰写论文1～2篇。 （3）总结汇报，结题，拟定后续研究方向和申报新 研究项目。 四、年度进展安排 四、技术路线 维吾尔族住院患者 乳腺良性肿块 通过术前检查及临床体征初步判断，同时进行流行病学调查 手术治疗 乳腺癌 病理确诊 收集组织标本，检测BRCA1基因启动子甲基化水平 数据统计BRCA1基因启动子甲基化与维吾尔族乳腺癌发生的关系 探讨维吾尔族乳腺癌早期诊断、干预、I级预防的依据及新途径 五、可行性分析 1、理论基础：甲基化是除基因突变和缺失以外导致抑癌基因 失活的第三种机制，在肿瘤的发生、发展中起重要的作用 。 2、硬件基础： （1）研究对象来源充足： （2）实验设备保障： （3）DNA启动子甲基化检测工作委托生物公司来完成。 （4）课题组成员：结构合理（分子生物学专业、统计流行病专业） 3、研究基础： （1）实验基础：课题组前期对维吾尔族和汉族人群BRCA1基因突变检 测有了初步的研究和结论，已提取了部分病例的血液及组织DNA。 （2）技术