基因修饰人骨髓间充质干细胞作为骨组织工程种子细胞-西南医院骨科.PDFVIP

8·38 · 中华创伤杂志 2005年 11月第 2 1卷第 11期 　Ch in J Traum a, November 2005, Vol. 2 1, No. 11 ·骨组织工程 · 基因修饰人骨髓间充质干细胞作为 骨组织工程种子细胞异种 移植的实验研究 代飞 　吴军 　许建中　王序全 　陈烯伟 　贺伟峰 ( ) 　　【摘要 】　目的　观察人细胞毒性 T淋巴细胞相关抗原 4 - 免疫球蛋白融合蛋白 hCTLA4 - Ig ( ) 基因修饰的人骨髓间充质干细胞 hM SC s 作为种子细胞异种移植到 F344 大鼠体内是否成骨 ,探索 获得骨组织工程异基因种子细胞的一种方法 。　方法 　应用含有目的基因 hCTLA4 - Ig和增强绿色 ( ) ( ) 荧光蛋白 EGFP 的逆转录病毒感染第 1代 hM SC s,应用 G4 18筛选出抗性细胞群 hM SC s - CTLA4 ; ( ) 用逆转录 - 聚合酶链反应 RT - PCR 和免疫细胞化学方法分别检测 hM SC s - CTLA4 中 hCTLA4 - Ig ( ) mRNA 和蛋白质表达 。用荧光激活细胞分选仪 FACS 检测 hM SC s - CTLA4 中表达 hCTLA4 - Ig蛋 白的阳性率 。将 hM SC s - CTLA4作为种子细胞在体外构建组织工程骨并移植到 F344 大鼠皮下 ,用 X线片、组织形态学、免疫组织化学方法分别观察其体内成骨状况和 hCTLA4 - Ig表达情况 。　结果 分离的 hM SC s CD 105表达阳性 , CD34表达阴性 。hM SC s - CTLA4 的细胞形态呈梭形 ,与 hM SC s比较 无明显改变 ;倒置荧光显微镜观察见绝大多数细胞呈绿色 ,强阳性表达 EGFP。RT - PCR、免疫细胞 化学结果分别证实 hM SC s - CTLA4表达 hCTLA4 - Ig mRNA 和蛋白。FACS检测结果显示 : hM SC s - CTLA4表达 hCTLA4 - Ig蛋白的阳性率为 78. 4% 。本实验构建的组织工程骨 ,每克脱钙骨基质 ( ) ( ) 6 DBM 上吸附、生长的细胞约 1～1. 5 ×10 个 。DBM / hM SC s - CTLA4组植入 F344大鼠皮下术后 2 ～12周均可检测到 hCTLA4 - Ig阳性表达细胞 , 8～12周出现人源性新生骨组织 ;而单纯 DBM 组与 DBM / hM SC s组表现为 DBM 逐渐被吸收 ,代之以纤维结缔组织 ,没有新生骨组织出现 。　结论 　以 hM SC s - C