奶牛外周血树突状细胞体外诱导培养与鉴定-动物营养学报.pdfVIP

动物营养学报２０１６，２８（７）：２１８４⁃２１９０ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１６．０７．０２４ 奶牛外周血树突状细胞体外诱导培养与鉴定 詹　 康　 赵倩明　 隋雁南　 封飞飞　 占今舜　 赵国琦∗ （扬州大学动物科学与技术学院，扬州 ２２５００９） － － 摘　 要： 通过粒 巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ⁃ＣＳＦ）和白细胞介素 ４（ＩＬ⁃４）体外诱导外周血单 核细胞为树突状细胞，为利用树突状细胞免疫疗法治疗奶牛乳房炎奠定基础和提供细胞模型。 利用淋巴细胞分离液分离获得奶牛外周血单核细胞，在６ 孔板内培养２ ｈ后，弃掉含有大量的Ｔ 细胞和Ｂ 细胞上清液，贴壁的基本上是单核细胞，磷酸盐缓冲液清洗５ 次，加入含有ＧＭ⁃ＣＳＦ和 ＩＬ⁃４ 的２ ｍＬ培养基进行３ ｄ诱导。 之后，从培养基顶部小心吸弃１．４ ｍＬ 的培养基，然后再补加 含有ＧＭ⁃ＣＳＦ和ＩＬ⁃４ 的１．８ ｍＬ培养基继续诱导３ ｄ。 每天通过显微镜观察细胞形态。 第７ 天 经流式检测细胞表面抗原 ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、主要组织相容性复合体Ⅱ（ＭＨＣⅡ）、ＣＤ４０、ＣＤ８０、 ＣＤ８６ 的表达。 结果表明：１）第２ 天，一些细胞表面可以生长出刺突并伴随着伪足的生长。 第３ 天，细胞表面的刺突和伪足越来越多。 第４、５ 天，一些带有刺突和伪足的细胞开始聚集和融合。 第６ 天，单核细胞基本被诱导为树突状细胞，细胞表面含有大量清晰可见的刺突和伪足。 ２）经 流式检测，ＣＤ１４、ＣＤ１１ｃ、ＭＨＣⅡ阳性表达细胞分别占诱导细胞的６．８％、６５．０％、７５．９％，ＣＤ８０ 和ＣＤ８６ 阳性表达细胞分别占诱导细胞的２．０％和 １．２％。 综上所述，采用奶牛外周血单核细胞 经体外诱导能够获得一定纯度的奶牛树突状细胞。 关键词： 细胞免疫治疗；单核细胞；树突状细胞；奶牛乳房炎 中图分类号：Ｓ８５２．２　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１６）０７⁃２１８４⁃０７ 　 　 近年来有关树突状细胞的表型、功能及细胞 分选未成熟的树突状细胞是不可行的。 动物体内 ［１］ 免疫疗法等方面的研究已成为热点 。 细胞免疫 的大部分的前体细胞是单核细胞，在一定条件下 疗法主要通过对疾病动物进行静脉采血，然后在 能够定向分化为所需要的目的细胞。 因此，本试 体外获得的外周血单核细胞，经过特定培养条件 － 验通过体外获得单核细胞，再经过粒 巨噬细胞集 下定向诱导为树突状细胞，被诱导的细胞与病原 － 落刺激因子（ＧＭ⁃ＣＳＦ）和白细胞介素 ４（ＩＬ⁃４）细 菌或抗原共孵育，最后经过静脉注射至动物体 胞因子诱导，以期获得未成熟的奶牛树突状细胞。 ［２］ 内 。 奶牛乳房炎是奶牛最重要的疾病之一，直 同时，奶牛营养与免疫的关系能够得到很好的阐 接导致产奶量下降，甚至淘汰，这给畜牧业经济带 明。 人和动物体内有很多抗原呈递细胞，如单核 ［３］ 来严重的损失 。 因此，利用未成熟的树突状细 细胞、巨噬细胞和树突状细胞。 其中，树突状细胞 胞治疗奶牛乳房炎具有重要意义，然而，如何在体 是人体内功能最强的抗原递呈细胞。 树突状细胞 外获得一定纯度的未成熟树突状细胞阻碍了利用