密码子优化的hpv6bl1dna诱导balb／c小鼠产生增强的免疫应答.pdfVIP

圈匿生堑剑昌堂苤查!Q塑生!旦箜!!鲞笙垒翅丛』旦i!!!臣!坐：叁坠段塾!Q堕：y!!：!!：盟!：璺 ·169· ·论著· L1 密码子优化的HPV6bDNA诱导BALB／c 小鼠产生增强的免疫应答 陆丽君石朝辉孟锐锋朱珊丽 肖敏张丽芳 【摘要】 目的探讨真核细胞偏好密码子优化对人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)6b型 L1DNA诱导BALB／c小鼠特异性体液和细胞免疫应答的增强效应。方法利用PCR从尖锐湿疣组织 中扩增HPV6b L1基因，将其克隆至真核表达质粒pcDNA3．1(十)，构建野生型pcDNA3．1(+)／ HPV6bLl(wt)并进行鉴定；同时，对HPV6bL／基冈进行真核细胞偏好密码子优化，进一步通过重叠 PCR的方法获得全长基因，构建密码子优化的重组质粒pcDNA3．I(+)／HPV6bLl(mod．)并进行鉴定。 免疫前和免疫后每隔2周，收集血清，用间接ELISA检测血清igG抗体；并于第8周取小鼠脾细胞，采用 乳酸脱氢酶释放法，按效应细胞与靶细胞之比(E：T)为5：1、10：1、20：I进行免疫小鼠特异性CTL杀伤 活性检测。结果 成功构建了密码子优化的HPV6b LI重组质粒。小鼠免疫后血清特异性IgG抗体水 平随着免疫时间和次数的增加而升高。pcDNA3．1(+)／HPV6bLl(mod．)组血清IgG抗体在第8周达 有统计学意义(t=20．072、t=22．457，P值均0．01)。在特异性CTL杀伤实验中，当E：T分别为5：1、 L1 结论密码子优化的HPV6bDNA可诱导BALB／c小鼠产生增强的特异性体液和细胞免疫应答。 【关键词】人乳头瘤病毒6；衣壳蛋白质类；密码子；抗体生成；免疫，细胞 Codon-modifiedHPV6bL1DNAcanenhanceimmune inBALB／cmice response LU厶-jun‘．SHI a1．’InstituteMolecular and Microbio— Zhao-hui，MENG of VirologyImmunology，Departmentof Rui-feng，et and Medwal Immunology，Wenzhou 325035，China logy College，Wenzhou author：ZHANG 26．corn Corresponding Li缸ng，Entail：wenzhouzlf@1 To enhanced immune inBALB／cmiceimmunized 【Abstract】Objective specific response explore withcodon-modifiedhuman DNA．MethodsA 6b(HPV6b)L1 papillomavirustype wild—type(wt)HPV6b LI wasextractedfromtissue of with acuminataandinsertedinto gene samplespatientscondyloma eukaryotic vector constructarecombinant expressionpcDNA3．1(+)to plasmidpcDNA3．1(+)／HPV6bL