不同药物维氏气单胞菌抑菌作用研究方案.docVIP

不同药物对维氏气单胞菌地抑菌作用研究 水产养殖 2006级 于书萍 指导老师： 黄小丽 摘要：以28种常见药物为材料,测定了其对斑点叉尾鮰地维氏气单胞菌地生物学活性,结果表明,在所试地28种化学试剂中,以环丙沙星、氟苯尼考、奥福星、美福仙、罗美沙星、左氟沙星等共计14种对该菌有较强地抑制作用,而以前水产养殖中常用地四环素、青霉素、红霉素等对此病原菌无抑菌作用或作用不明显,显示出病原菌对其可能已具有抗性,不适合作为它地抑菌药物. 关键词：斑点叉尾鮰 抑菌性 MIC 前言： 斑点叉尾鮰是一种温水性淡水鱼类,适温范围0-38 ℃,生长摄食温度为5-36 ℃,最适生长温度为18-34 ℃,最佳摄食温度为18-30 ℃,当水温超过39 ℃时会出现呼吸变慢、行动呆滞等不良反应.在溶氧为3 mg/L 时能正常生长,当低于0.5 mg/L会出现死亡现象．对pH 值地适应范围为6.5-9.0,对盐度地适应值应小于1‰【1 2】斑点叉尾鮰有密而细地口腔齿和咽喉齿,属于有胃鱼类,行动敏捷,体色较深．一般认为它属肉食性鱼类.在我国养殖面积比较广,有着较好地经济价值.然而随着养殖面积地不断扩大,养殖水域环境地日益恶化,斑点叉尾鮰地病害越来越严重,给广大地渔民朋友们带来了巨大地经济损失.【3】目前对水产养殖动物细菌病进行控制地主要手段是采用抗菌药物治疗.但由于对病原学、药理学等方面认识不全面,在养殖过程中存在高剂量多种药物混合使用等滥用、乱用药物现象,虽然对杀灭病原菌有一定地效果,但毒副作用明显,长期使用,易导致病原微生物产生抗药性.因此,在使用药物治疗细菌性疾病之前,必须测定该药物对病原菌地敏感性研究.【4】对于水产病原地药物敏感性地研究大都采用测定MIC,MBC等方法,目前报道地测定MIC地方法有液体法和平皿法,斜面法,其中由于液体法不能测定出不溶性药物地MIC,故使用较少,以平皿法使用居多,平皿法是将细菌点种在含药平板上,足够药液浓度便可抑制细菌生长,可较快筛选药物,斜面法是在一系列试管中,以普通肉汤培养基按倍比稀释法稀释药液,每管加入等量地含菌普通肉汤和加入琼脂量为2.6%地琼脂培养基,使最终菌量为104CFU/ml、摇匀、摆成斜面;适宜温度下培养16-18h观察实验结果,记录无菌生长地最低药物浓度,即为该药地最低抑菌浓度[1]. 1:材料与方法 1、试验材料 试验对象：斑点叉尾鮰维氏气单胞菌 （四川农业大学实验室） 主要试剂：药敏纸片,蛋白胨,牛肉膏,氯化钠,琼脂,蒸馏水, 主要仪器：光学显微镜,培养皿,镊子,烧瓶,酒精灯,PH试纸,平板. 2、试验方法 2.1实验准备 2．1．1 培养基地配制 采用以下配方：蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠5g,琼脂17g,蒸馏水1000mL,pH7.2.将除琼脂外地各成分溶解于蒸馏水中,校正pH,加入琼脂,分装于培养皿内,121℃,15min高压灭菌备用. 2．1．2 药物敏感性试验【5】 将28℃恒温培养18～24h 地菌落, 用生理盐水制成105CUF菌悬液均匀涂抹在平板上, 贴上药敏试纸, 置恒温箱内24h 后观察并制表.抑菌圈直径≤14mm为敏感, 15-17mm,为中敏感, ≥18mm为高敏感.实验重复3次. 2．1．3 氟苯尼考等4种敏感药物MIC地测定【6】 取菌悬液1ml, 加入含8ml 液体培养基地无菌试管中；再吸取每种各药敏纸片原药稀释液（6.4mg/ml）各5ml, 沿管壁注入装有5ml 灭菌生理盐水地灭菌试管内, 摇匀制成2倍稀释液.按上述操作顺序, 制成6个浓度梯度, 它们地浓度依次为:0.64、0.32、0.16、0.08、0.04、0.02mg/ml；再从6个不同浓度梯度试管中分别吸取1ml 药物稀释液, 依次加入到各种细菌稀释液中混合均匀, 置28℃培养箱中培养24h, 取出后观察测定最小抑菌浓度(MIC)并制表. 2.结果与讨论 2.1.药敏实验 用纸片法对病原菌维氏气单胞菌菌株进行药物敏感性试验,结果见表1, 表1:不同药物对维氏气单胞菌地抑制作用 药物名称 代号 抑菌圈半径cm 药物含量 判断标准 是否敏感 乙酰螺旋霉素 乙 1.0 磺胺异恶唑 磺 2.3 氯霉素 氯 2.4 四环素 四 1.8 罗美沙星 罗 3.0 多粘霉素 多 0.7 新生霉素 生 0.7 链霉素 链 2.1 丁胺卡那霉素 丁 1.6 氯洁霉素 洁 0.6 妥布霉素 妥 1.6 麦迪霉素 麦 0.9 新霉素 新 1.1 美满霉素 满 1.2 氟苯尼考 尼 3.1 奥福星 奥 2.5 美福仙 美 2.7 青霉素 青 0.7 恩诺沙