第六章种子扩培.ppt

3、菌种扩大培养的目的 4、种子标准 菌种细胞生长活力强，迟缓期短 生理性状稳定 能满足大发酵罐要求 无杂菌污染 保证稳定的生产能力。 种子扩大流程图 一般情况：培养基糖分要少，氮源要多，无机盐所占的比例要大。种子罐和发酵罐培养基成分趋于一致也有好处，种子很快适应，但各成分的数量根据目的各自确定。 总之，各成分选择得当，才能发挥菌种的特征，提高产量。 一般相对湿度40~45%时孢子数量最多，孢子颜色均匀，质量较好。　 通气量：提高种子质量，如青霉素发酵，一级种子通气1：3，二级种子1：1.1-1.5，否则菌丝结团，影响种子质量。 冷藏时间：如土霉素菌种孢子斜面培养四天左右，即于4℃冰箱保存，发现冷藏7~8天菌体自溶，而培养五天以后冷藏，20天未发现自溶。 　 链霉素生产菌，斜面孢子在6 ℃冷藏两个月后的发酵单位比冷藏一个月降低8%。 2、 无菌检查： 显微镜观察、种子液进行无菌检验、生化分析。 种子液平板划线、斜面培养用肉眼观察是否有异常菌落、异常现象及镜检是否有杂菌。 六、工业微生物培养的类型 通气培养法：生产菌种以需氧菌和兼性需氧菌居多，它们生长 的环境必须供给空气，以维持一定的溶解氧水平 ， 使菌体迅速生长和发酵，也称为好气性培养。 　　　　 2、固体培养（发酵）法(solid culturing)： 固体培养又分为浅盘(shallow pan)固体培养和深层固体培养，统称曲法培养。它起源于我国酿造生产特有的传统制曲技术。其最大特点是固体曲的酶活力高。 * * 第六章 种子扩大培养　 一、种子扩大培养的任务和目的 1、种子扩大培养的任务，不但要得到纯而壮的培养物，还要获得活力旺盛的、性能稳定、接种数量足够的、纯的培养物。 2、种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经扁平或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。 为发酵罐的投料提供足够数量的代谢旺盛的种子。因为发酵时间的长短和接种量的大小有关，接种量大，发酵时间则短。将较多数量的成熟菌体接入发酵罐中，就有利于缩短发酵时间，提高发酵罐的利用率，并且也有利于减少染菌的机会。 对于不同产品的发酵过程来说，必须根据菌种生长繁殖速度快慢及生产的规模决定种子扩大培养的级数。 二、种子扩大培养(制备)阶段 实验室种子的制备： 生产车间种子制备: A 实验室种子的制备： e.g 产黄青霉菌(P.chrysogonum) 原始菌种 斜面试管 获得孢子 250ml 茄子瓶（大米或小米） 25 ~28 ℃ ，4~14天 成熟（在真空下抽去水分，使水分含量在10%以下 ，于4 ℃冰箱保存）。 　　 　　对于不产孢子的赤霉素生产菌，也可用大米固体培养基在茄子瓶中培养菌丝体，用作种子罐种子。 产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，如产链霉素的灰色链霉菌，产卡那霉素的卡那链霉菌，可以用摇瓶液体培养法，孢子接入含液体培养基的摇瓶中，于摇床上培养，获得菌丝体，作为种子。 不产孢子的细菌，如生产谷氨酸的棒状杆菌、短杆菌，生产上一般采用斜面营养细胞进行扩培，再转入液体摇瓶培养，获得细胞悬液再接种。 e.g. Glutamic acid-producer：（谷氨酸生产菌） 原始菌种（出发菌种） 固体试管斜面（32 °C ，18~24小时） 三角瓶培养（摇床） 种子罐培养 e.g. 　 yeast： 原始菌种（出发菌种） 10ml 麦汁试管 250ml 三角瓶培养