不同逆转录载体系统应用于水牛胎儿成纤维细胞转基因的探索.pdfVIP

第３４卷 第４期 华南农业大学学报 Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．４ 　　　　　　　　　　 　　 　　　　　　　　 ２０１３年１０月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｃｔ．２０１３ 不同逆转录载体系统应用于水牛胎儿成纤维细胞 转 基 因 的 探 索 邓彦飞，刘真真，李云芳，刘庆友，罗　婵，杨素芳，石德顺 （广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广西 南宁５３０００５） 摘要：采用２种不同的逆转录病毒载体系统（ｐＭＸ和ｐＭＳＣＶ），构建携带绿色荧光蛋白（ＥＧＦＰ）基因的重组载体，探 索能高效感染水牛胎儿成纤维细胞（ＢＦＦｓ）的病毒系统和感染方法．结果发现，２种逆转录病毒系统包装出的重组 ６ ７ 病毒滴度都能达到１０，将ｐＭＸ病毒系统生产的重组病毒经超速离心浓缩后，滴度可达到１０；２种重组病毒都能感 染ＢＦＦｓ，但ｐＭＸ系统比ｐＭＳＣＶ系统更能有效地感染ＢＦＦｓ；通过对病毒的感染方式进行比较，发现使用新鲜病毒 连续感染ＢＦＦｓ２次（每次间隔１２ｈ），或者经过超速离心浓缩后的病毒感染ＢＦＦｓ１次，可以显著提高感染效率． 关键词：逆转录病毒载体；转基因；水牛；胎儿成纤维细胞 中图分类号：Ｓ８１４．８　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１３）０４０５５８０６ ＩｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆＢｕｆｆａｌｏＦｅｔａｌＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｂｙＴｗｏＲｅｔｒｏｖｉｒｕｓＳｙｓｔｅｍｓ ＤＥＮＧＹａｎｆｅｉ，ＬＩＵＺｈｅｎｚｈｅｎ，ＬＩＹｕｎｆａｎｇ，ＬＩＵＱｉｎｇｙｏｕ，ＬＵＯＣｈａｎ，ＹＡＮＧＳｕｆａｎｇ，ＳＨＩＤｅｓｈｕｎ （ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＡｇｒｏｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ， ＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ５３０００５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｆｔｅｒｔｗｏｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｓｙｓｔｅｍｓｗｉｔｈｅｎｈａｎｃｅｄｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ（ＥＧＦＰ）ｒｅｐｏｒｔｇｅｎｅｗｅｒｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｓｙｓｔｅｍｓａｎｄｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｂｕｆｆａｌｏｆｅｔａｌｆｉｂｒｏ ６ ｂｌａｓｔｓ（ＢＦＦｓ）ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｔｉｔｅｒｏｆｔｈｅｔｗｏｓｙｓｔｅｍｓｗａｓ１０， ７ ａｎｄｔｈｅｔｉｔｅｒｏｆｔｈｅｐＭＸｓｙｓｔｅｍｃｏｕｌｄｂｅｕｐｔｏ１０ａｆｔｅｒｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｐＭＸｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｓｙｓｔｅｍｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｐＭＳＣＶｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｓｙｓｔｅｍ．Ｕｓｉｎｇｔｈｅｆｒｅｓｈ ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｅｄＢＦＦｓｔｗｉｃｅ（１２ｈｉｎｔｅｒｖａｌ）ｏｒｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｅｄＢＦＦｓｏｎｃｅｃｏｕｌｄｉｍ ｐｒｏｖｅｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒ；ｔｒａｎｓｇｅｎｅ；ｂｕｆｆａｌｏ；ｆｅｔａｌ