基因工程抗体.ppt.pptVIP

抗体研究进展3个阶段： 　①1890年白喉抗毒素，多克隆抗体； 　②1975年杂交瘤技术单克隆抗体； 　③1994年基因工程抗体； 第四节 基因工程抗体与噬菌体抗体库 一、噬菌体抗体库技术的基本方法 ⒈获取目的基因 ⒉抗体库技术的载体 ⒊淘筛 ⒋鉴定与表达 二、噬菌体抗体库技术的特点 ⒈模拟天然全套抗体库 ⒉避开了人工免疫和杂交瘤技术 ⒊可获得高亲和力的人源化抗体 三、基因工程抗体表达 第五节 抗体诊断试剂 一、血清学鉴定用的抗体类试剂 　指用已知抗体来鉴定未知的抗原型，主　　　要用于疾病的病原菌的诊断和血型鉴定 ⒈鉴定病原菌的血清抗体试剂 ⑴常用诊断血清的品种和用途 ⑵诊断血清的制备步骤 ①制备细菌抗原 ②免疫动物和制备抗体血清 ⑶诊断血清诊断方法 ⒊妊娠诊断试剂 ⒋抗ABO血型系统血清 ABO血型抗血清的制备：可以用人的血、用人血型物质A、B动物免疫动物、单克隆抗体 二、免疫标记技术用的抗体类试剂 ⒈荧光抗体诊断试剂 ⒉免疫酶抗体诊断试剂 ⒈荧光抗体诊断试剂 ⑴荧光抗体的制备 ⑵免疫荧光测定方法 ①HBsAg酶标诊断试剂 ②HBeAg酶标诊断试剂 ③HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）标诊断试剂 ④测定HIV（人免疫缺陷病毒）抗 原的酶标抗体诊断试剂 ⑤甲胎蛋白（AFP）酶标抗体诊断试剂 ⑥癌胚抗原（CEA）的酶标抗体诊断试剂 ⒊放射免疫用抗体诊断试剂 是将放射性核素分析的高度灵敏性与抗原抗体反应的特异性结合起来建立的检测技术 ①氯胺-T法 ②Iodogen氏法 　①夹心法 　②间接法 　③竟争法 计算：测定复合物中标记抗原、游离标记抗原 三、导向诊断药物 放射性核素标记抗体－－－ 肿瘤放射免疫显像 ①在体内确切肿瘤定位作用，准确性达90%，灵敏度达100%； ②在体内可检出0.5cm大小的病灶，并可检出肺脑的转移灶； ③小分子抗体易到达肿瘤部位， 可显著提高N/NT值； ④抗体在肿瘤部位可保留6～9日； ⑤能观擦抗体在血中的半衰期和可能出现的不良反应。 1）将抗肿瘤单克隆抗体（Ab）与二乙基三胺五乙酸（DTPA）在体外偶联成Ab-DTPA，再注入体内后，就能与体内组织相结合。 2）3天后注入放射性核素In-113M（半衰期100m），因DTPA是重金属离子络合剂，所以In-113M可以结合到DTPA分子上，使肿瘤组织显像。这一过程在2小时内可完成。 小结 第一节 了解 第二节 熟悉、掌握单克隆抗体 第三节 熟悉、掌握单克隆抗体的改造 第四节 熟悉、掌握噬菌体抗体库技术 第五节 了解 作业 1、简述单克隆抗体的概念及制备过程。 2、细胞融合常用的方法？ 3、为什么HAT培养基能将杂交瘤细胞选择出来？ 4、动物免疫的方法及途径有哪些？各有何优缺点？ 5、什么是克隆化？常用哪些方法？ 6、鼠源性单克隆抗体改造后获得哪些抗体？它们的概念（原理） 7、什么是噬菌体抗体库及噬菌体展示技术？。 8、噬菌体抗体库技术的基本方法。 9、噬菌体抗体库技术的特点。 10、荧光抗体诊断试剂、免疫酶抗体诊断试剂、放射免疫用抗体诊断试剂、放射免疫显像定位技术的概念 试剂制备步骤： 用乙型肝炎病毒抗原免疫鼠 获得抗乙型 肝炎病毒的血清 经硫酸铵盐析和DEAE-Sephadex柱层析 得IgG 人红细胞用丙酮和甲醛处理 加入pH4.0磷酸缓冲液 洗去多余蛋白 加入 1）人源性ABO血型抗血清 采集健康献血者的血，凝固后置4℃冰箱中过夜，将杂质抗体和血块一起除去，然后分离血清，56 ℃30min使补体活性丧失，如果此血清中含有B抗体（抗B血清） 2）动物源性ABO血型抗血清 用人血型物质A抗原和B抗原，免疫马而得到的抗体血清；人的血型物质人的红细胞或唾液，免疫成功后用人O型红细胞吸收掉非特异性抗体，除菌过滤 方法：玻片直接凝集反应 3）单克隆抗体是应用B淋巴细胞杂交瘤技术生产抗A或B血清 ⒊放射免疫用抗体诊断试剂 是用荧光色素（异硫氰酸、罗丹明、藻红素等）标记抗体，成为荧光抗体，荧光抗体与微量抗原结合后在营光显微镜下成为发光可见物 用碳酸缓冲溶液(CB)将抗体溶液浓度调为20mg/ml 用CB将荧光色素调为0.2mg/ml 电磁搅拌，缓慢滴入 流水、磷酸缓冲盐水透析 SephadexG25吸附 用碳酸钙调pH，使溶液pH在9.0-9.5 4℃下搅拌6－12h 洗脱液 直接法 间接法 采用荧光抗体直接与抗原反应，用于抗原鉴定、定位、分布 采用荧光标记抗球蛋白抗体（荧光第二抗体）来检测未知抗原检测时，只用未标记的相应抗体处理标本，充分洗涤后，再加荧光第二抗体，再洗涤，只荧光显微镜下观察，如见到荧光，表明有