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口腔细胞培养 牛晨光 2017 年5 月13 日 明德新民，止于至善 提要 掌握 ◦ 细胞培养基本原理及方法 ◦ 口腔医学中相关细胞培养及其特点 明德新民，止于至善 明德新民，止于至善 思考题 贴壁细胞和悬浮细胞的基本特征 明德新民，止于至善 第一节 细胞培养 明德新民，止于至善 细胞培养的基本概念 细胞培养： ◦ 模拟体内的生理环境，在适当的条件下，使活体组 织细胞在体外环境存活、生长增殖，并维持其结构 功能 原代培养： ◦ 取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在 传代之前称为原代培养 传代培养： ◦ 细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到 新的培养器皿中 明德新民，止于至善 体外细胞生物学 形态特点 ◦ 贴壁型细胞 ◦ 悬浮型细胞 生长增殖过程 ◦ 培养细胞生命期 ◦ 培养细胞一代生存期 明德新民，止于至善 贴壁型细胞 必须贴附于支持物表面才能生长。 大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞 按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型： ◦ 上皮型 ◦ 成纤维型 ◦ 游走型 ◦ 多形型 明德新民，止于至善 悬浮型细胞 于悬浮状态下即可生长 不需要贴附于支持物表面 多见于血液淋巴细胞 明德新民，止于至善 明德新民，止于至善 培养细胞生命期 所谓培养细胞生命期，指细胞在培养中持续增 殖和生长的时间。 细胞全部生存过程大致分为以下三个阶段： ◦ 原代培养期：也称初代培养，即从体内取出组织接种 培养到第一次传代阶段，一般持续1～4周。 ◦ 传代期：初代培养细胞一经传代后便改称为细胞系。 在全生命期中此期的持续时间最长。 ◦ 衰退期：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖； 细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡 明德新民，止于至善 细胞永生性与细胞系 也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，成为 无限细胞系 无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或第 三期初阶段 细胞获不死性后，核型大多变成异倍体。可能 恶性变 细胞永生性和恶性性非同一性状 明德新民，止于至善 明德新民，止于至善 培养细胞一代生存期 所谓细胞“一代”，系仅指从细胞接种到分离再 培养时的一段时间，细胞传代后，一般要经过以 下三个阶段: ◦ 潜伏期（游离期，贴壁期） ◦ 对数生长期 ◦ 停滞期（平台期） 明德新民，止于至善 明德新民，止于至善 细胞生长过程中的重要现象 接触抑制：由于细胞的相互接触而抑制细胞运 动 密度抑制：细胞因营养的枯竭和代谢物的影响 而停止生长 接触依赖：细胞存在相互作用，存在一定的接 触才能正常生长 密度依赖：细胞需要达到一定密度，才能快速 生长 明德新民，止于至善 培养细胞的体外生长环境 无污染环境 基质 气体环境和氢离子浓度 液相环境 温度 渗透压 明德新民，止于至善 细胞培养常见仪器 明德新民