LCMSMS农药一齐分析法(Ⅱ).docVIP

1. 适用范围 适用于LC/MS/MS农药的一齐分析法（Ⅱ）中农药的检测。 2. 编制依据 依据日本厚生劳动省《LCMS农药一齐分析法Ⅱ》编制。 3. 方法原理 水果、蔬菜、加工产品中的农药残留经乙腈提取，提取溶液经净化、浓缩用50%的甲醇定容后，LC/MS/MS测定，用外标法定量。 4. 试剂 4.1 乙腈：色谱级 4.2 丙酮：色谱级 4.3 正己烷：色谱级 4.4 乙酸乙酯：色谱级 4.5 无水硫酸钠：分析纯 4.6 甲苯：色谱级 4.7甲醇：色谱级 4.8 氯化钠：分析纯 4.9 0.01M 盐酸：8.29ml浓盐酸定容至1000ml 5. 仪器设备 5.1 Waters UPLC TQD 5.2 食品加工器 5.3菜刀，案板 5.4电子天平 5.5均质机 5.6布氏漏斗，分液漏斗，普通漏斗，滤纸 5.7梨形瓶（250ml，100ml） 5.8 锥形瓶（200ml，100ml） 5.9 C18固相萃取柱 （1G 6ml） 5.10氨基复合柱 （Carbon/NH2 500mg 6ml） 5.11硅胶柱 Silica （500mg 6ml） 5.12旋转蒸发仪 5.13 氮吹仪 5.14 玻璃离心管（10mL） 5.15 分液漏斗振荡器 5.16 真空泵 5.17 移液枪（1mL，200μL） 6. 分析步骤 6.1 试料的制备：（除不加样品外，试剂空白与样品同步处理） 将送交实验室的不少于500克的样品于食品加工器搅细（对于大块状的样品可先用水果刀切成小块，再放于食品加工器中搅细）。粉碎后的样品装于一次性的塑料袋中备用。 6.2 提取 6.2.1 准确称取10.0g（精确到0.1g）搅细的样品（原料称取20.0g）于均质杯中，加入70ml乙腈，在高速组织捣碎机中均质5min。 6.2.2 将样品减压抽滤，用30ml乙腈冲洗均质杯，也过滤，合并滤液。 6.2.3 将滤液倒入装有7gNaCl的300ml分液漏斗中，用20mL0.01M 盐酸冲洗三角瓶，也倒入分液漏斗中，在分液漏斗震荡器上剧烈震荡10min，静置10min，使乙腈相和水相分层。 6.3浓缩 准确移取全部上层清液于茄形瓶中。在40℃水浴锅中旋蒸至大约20ml。 6.4净化 6.4.1 用乙腈10mL活化固相萃取柱（BE-C18）；将约20ml样品液过萃取柱后，用3mL 乙腈冲洗容器，并作为溶出液过柱子，溶出液约23ml用三角瓶接收； 6.4.2 加无水硫酸钠3-4勺干燥，静置（约15min）；过滤，用40mL乙酸乙酯（10~20ml×2~3回）洗涤三角瓶，过滤，合并滤液 ； 6.4.3 将滤液在40°C下减压条件下浓缩，至近干；用3mL 丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）溶解。 6.4.4 将ENVI-Carb LC-NH2和Sep-pak Vac Silica 固相萃取小柱串联依次用5ml甲醇、5ml丙酮、10ml正己烷润洗，倒入样品的丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）溶解液，再用10mL丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）冲洗茄形瓶，亦倒入。用2mL丙酮：甲醇（1：1）冲洗样品瓶，倒入萃取柱，收集，再将18 mL丙酮：甲醇（1：1）倒入萃取柱，收集。 6.4.5 将滤液在40°C下减压条件下浓缩，至近干；用5mL50%的甲醇水溶液溶解，超声溶解，取1.5ml于1.5mL EP管中10000rpm，10min，离心，取上清液过0.22μm尼龙滤膜，过滤，移入样品瓶中待测。 7.分析条件 7.1 UPLC条件 Waters ACQUITY UPLC 移动相 A 5mM 醋酸铵（AcNH4））Cone - Extractor 3V RF Lens 0.1V Source Temp 150℃ Desolvation Temp 400℃ Desolvation Gas Flow 900L/hr Cone Gas Flow 50L/hr LM Resolution 1 11.0 HM Resolution 1 11.0 Collision Gas Flow 0.15mL/min 8. 操作流程图： 附表 LC/MS/MS农药的一齐分析法（Ⅱ）检测明细 序号 項目名（中国語） 項目名（英語） ESI 母离子 cone（V 子离子 collision（V) 方法 1 1-萘基乙酸 1-Naphthylacetic acid — 184.9 16 141 12 0.01 184.9 5 2 (2,4-二氯苯氧基)乙酸丁酯 2,4-D（2,4-PA) 218.8 22 160.8 14 0.01 124.9 18 3 4-氯苯氧基乙酸 4-Chlorophenoxyacetic aci