家蝇变应原tropomyosin基因的克隆序列分析及诱导-生物技术通报.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2014 8 家蝇变应原 Tropomyosin 基因的克隆、序列分析及 诱导表达 魏川川  修江帆  王宇  国果  彭传林  吴沁怡  吴建伟 （贵阳医学院基础医学院，贵阳 550004） 摘 要 ： 对家蝇变应原原肌球蛋白 （Tropomyosin）基因进行同源克隆，序列分析 ；构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达。 从家蝇幼虫cDNA 文库中筛选获得Tropomyosin 基因。以该基因的cDNA 文库质粒为模板，进行PCR 扩增，获得家蝇Tropomyosin 完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽、二级结构、三级结构、抗原表位和亚 细胞定位等方面进行预测和分析。构建pEASY-E1-Tropomyosin 重组质粒，转化到大肠杆菌 （ ）中进行诱导表达。 OrigamiB DE3 Tropomyosin 基因ORF 全长828 bp，编码275 个氨基酸，理论分子量31.6 kD ；等电点为4.65，具有Tropomyosin 家族的蛋白保守结 构域。成功构建重组原核表达pEASY-E1-Tropomyosin 并诱导表达重组蛋白。 关键词 ： 家蝇 Tropomyosin 克隆 生物信息学 变应原 ， Cloning Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of Musca domestica Allergen Tropomyosin Gene Wei Chuanchuan Xiu Jiangfan Wang Yu Guo Guo Peng Chuanlin Wu Qinyi Wu Jianwei （Basic Medical College ，Guiyang Medical College ，Guiyang 550004 ） Abstract:  It was to probe into the homologous cloning of the Musca domestica allergen Tropomyosin gene, and then construct the prokaryotic expression vector which was expressed in Escherichia coli. Screening and isolation of Musca domestica Tropomyosin gene from Musca domestica cDNA library was carried out. The gene and encoded protein sequence of Tropomyosin was analyzed by bioinformatics methods , including general physical and chemical properties, signal peptide, secondary structure, tertiary structure, epitope and subcellular localization. Then plasmid - - we