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SPE_HPLC法测定马破伤风免疫球蛋白F_ab_2中TritonX_100残留
SPE－HPLC法测定马破伤风免疫球蛋白F(ab)2中TritonX－100残留量白文莉1，高家敏2，余振喜2*(1.昆明市食品药品检验所，昆明650032;2.中国食品药品检定研究院，北京100050)摘要目的:建立固相萃取高效液相色谱(SPE－HPLC)法测定马破伤风免疫球蛋白F(ab)2中灭活剂TritonX－100的残留量。方法:采用Oasis固相萃取小柱对样品进行预处理，以水和5%甲醇为淋洗剂，以甲醇为洗脱剂，收集甲醇洗脱物用于－1HPLC分析。采用ZOＲBAXExtend－C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，流动相为甲醇－水(80∶20)，流速1.0mL·min，检测波长230nm，柱温30℃，进样量10μL。结果:TritonX－100浓度在0.56～55.34μg·mL－1范围内，与峰面积线性关系良好(r=0.9998);检测限(S/N=3)为2.03ng，定量限(S/N=10)为4.06ng;提取回收率为91.8%。结论:本方法操作简便、准确、重复性好，可用于TritonX－100的残留量测定。关键词:马破伤风免疫球蛋白F(ab)2;TritonX－100;灭活剂;裂解剂;辛基苯氧基聚2－乙氧基乙醇;杂质残留检测;固相萃取;高效液相色谱法中图分类号:Ｒ917文献标识码:A文章编号:0254－1793(2014)07－1251－05DeterminationofTritonX－100residuesintheequineantitetanusimmunoglobulinF(ab)2bySPE－HPLCBAIWen－li1，GAOJia－min2，YUZhen－xi2*(1．KunmingInstituteforFoodandDrugControl，Kunming650032，China;2．NationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beijing100050，China)AbstractObjective:ToestablishaSPE－HPLCmethodforthedeterminationofTritonX－100residuesine-quineantitetanusimmunoglobulinF(ab)2．Methods:Sampleswerepre－treatedonOasisHLBSPEcolumn，thencleaned－upbywaterand5%methanol，andfinallyextractedbymethanol．TheanalysisofextractswasperformedonaZOＲBAXExtend－C18column(4.6mm×150mm，5μm)withamobilephaseconsistingofmethanol－water(80∶20，v/v)ataflowrateof1.0mL·min－1．Thecolumntemperaturewassetat30℃andtheinjectionvolumewas10μL．TritonX－100wasdetectedatthewavelengthof230nmwithaDADdetection．Ｒesults:Theestab-lishedHPLCmethodresultedinsharpandsymmetricpeaksofTritonX－100，whereasthecalibrationcurveofTritonX－100displayedagoodlinearitywithintheconcentrationof0.56－55.34μg·mL－1(r=0.9998)．TheLODandLOQwere2.03ngand4.06ng，respectively．Specificity，precision，accuracy，stabilityandrobustnesswereacceptable．Theextractionrecoverywas91.8%．Conclusion:Theresultsindicatethattheestablishedmethodisconvenient，accurateandreproducible，whichcanbeusedintheanalysisofTritonX－100residuesinequineant-itetanusimmunoglobulinF(ab)2．Keywords:equineantitetanusimmunoglobulinF(ab)2;TritonX－100;inactivator;splitagent;octylphenoxypoly-ethoxyethanol;impurityresiduedetection;
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