G-蛋白Rab3a对神经生长抑制因子(GIF)抑制神经元细胞生长作用的影响.pdfVIP

2005；32(11) 生物化学与生物物理进展Prog．Biochem．Biophys． ．1069． G．蛋白Rab3a对神经生长抑制因子 (GIF) 抑制神经元细胞生长作用的影响球 庞立岩茹炳根” (北京大学生命科学学院，蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室，北京100871) 摘要为了深入研究Rab3a和神经生长抑制因子(GⅡ0的相互作用，在大鼠海马神经元细胞原代培养体系中，用 抑制活性所必需的蛋白质，并且它们的相互作用受空间位置的因素影响较大．在随后对它们相互作用的机理和可 能的生物学意义进行了讨论． 关键词Rab3a，GIF，相互作用，大鼠海马神经元细胞培养，MTT还原测定法 学科分类号Q74 disease，AD)是一种放【，n．由于Rab3a在调控神经递质释放过程中起着 阿尔茨海默病(Alzheimers 以进行性认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经 关键作用，近年来，对它的研究曰益受到人们的 系统退行性疾病，其病理特征为神经元和突触选择 重视． 性的丢失【l】．尽管目前还无法确定AD的病因，但是 在用酵母双杂交和免疫共沉淀等鉴定方法的水平 许多证据表明，神经生长抑制因子(growthinhibitory 上，未能对它们相互作用的生物学意义与作用机制 factor，GIF)含量的下降会造成神经细胞轴突与树 突的过度生长，由于人脑中的营养水平无法支持这 深入说明．本研究运用大鼠海马神经细胞培养体系 种过度生长，使得神经细胞的生长处于流产状态， 就会导致脑中大量神经元细胞失活，这可能是形成 AD的主要因素之一．GIF主要分布于脑部中枢神经互作用的生物学功能． 系统，在Alzheimer’S症脑提取物的存在下，对培在后续的研究中，我们利用制备的GIF和 养的神经元细胞具有特异的生长抑制活性．值得注 Rab3a多克隆抗体在神经细胞培养体系中分别屏蔽 意的是，单独的GIF或单独的脑提取物均不具有 生长抑制活性，这表明，GIF可能是与脑提取物中 的其他因子协同作用而发挥其抑制功能的[2-51． 制神经细胞生长过程中的生物学地位，并对GIF 本实验室的康巧华博士【司用酵母双杂交方法发 和Rab3a的相互作用机理进行了讨论． 现GIF与G蛋白Rab3a之间存在特异的相互作用． 1材料与方法 Rab是一类与细胞分泌紧密相关的小分子单亚基G 1．1主要试剂 蛋白超家族(superfamily)，目前在哺乳动物中发现 了50多个成员．其中Rab3亚家族(subfamily)由 Rab3a、Rab3b、Rab3c及Rab3d4个成员组成． 清添加剂购自美国Gibco／BRL公司；胎牛血清、 Rab3a由220个氨基酸组成，是极其重要的功能性 蛋白质，主要分布于神经细胞中，调控神经递质释 放．在突触前神经元细胞中，Rab3a与Rabphilin一3、 +国家自然科学基金资助项目． ·+通讯联系人． Rim和Noc2等效应子蛋白结合，以一种Ca2+依赖 形式调控神经递质的释放【7叫o】．而在胰岛细胞中， Tel：010Fax：010 E—mail：mlab@pku．exlu．ca Rab3a与效应子蛋白Rim结合则调控胰岛素的释 收稿日期：2005．05—17，接受日期：2005—09—28 ．1070．