化学检出法.PPTVIP

(五) 展 开 1. 水蒸气的影响 2. 溶剂蒸气的影响 3. 展开槽 4. 展开方式 5. 几种新型的展开技术 6. 展开操作 * 1.水蒸气的影响 在吸附薄层色谱的展开过程中，空气的相对湿度以及展开槽中的水蒸气必须严格控制，微量的水也能对色谱分离结果产生较大的影响。 硅胶薄层板吸附水蒸气的速度很快，0.25mm厚、20×20cm的薄层板在50%相对湿度中约3分钟就失去活性的一半，而15分钟时吸附的水分已达到最大值，因此，点样速度的快慢，空气相对湿度的大小，都可以影响分离以及重现性。 适宜的相对湿度范围也决定于溶质和溶剂的极性。 * 2. 溶剂蒸气的影响 “边缘效应”：Stahl在用氯仿-甲醇（95：5）为展开剂展开麦角生物碱时发现，对同一种生物碱，在薄层板中部的Rf值比在边缘的Rf值小，称此现象为“边缘效应”（edge effect）。 展开槽中被展开剂蒸气饱和后再进行展开就可以消除。 图5 在未饱和展开槽中薄层板上出现的“边缘效应” 3.展开槽 普通展开槽 双底展开槽 水平展开槽 * 4.展开方式 (1)近水平展开：将点样后的薄层板下端浸入展开剂0.5cm，薄层上端垫高使薄层与水平成5-10o的角。 (2)上行展开：将点样后的薄层放在盛有展开剂的直立型的展开槽中，展开剂由薄层下端借毛细管作用上升至前沿。 (3)下行展开 (4)双向展开 * 薄层板 玻璃板 上涂吸附剂层 SiO2 Al2O3 上行法 薄层板 层析缸 展开剂 层析缸 展开剂 滤纸条 下行法 薄层板 * 几种新型的展开技术 (1) 程序蒸气展开（Vapor-programmed，VP） (2) 圆形色谱（Radial Chromatography） (3) 热板色谱(Hot plates Chromatography) (4) 多次展开（Multiple Development ） (5) 程序多次展开（programmed Multiple Development，PMD） (6) 阶式展开（stepwise development） (7) 梯度展开（gradient development） 问题一：这是一幅经典的关于薄层色谱入门的照片，请问：图中所分离的样品是什么？ 这是一种北美习用草药（Hydrastis canadensis）的三维色谱图请问：请说出该图谱是有用何种色谱联用技术获得的？ 分离各种染料的薄层色谱图请问：照片中的图谱采用了何种薄层展开技术？ 德国霍恩海姆大学食品化学系的一间实验室请问：照片中可观察到几种薄层色谱设备？ * 6 展开操作 1.展开槽的密闭 目的是使展开槽被展开剂蒸气饱和并使展开剂组成不变。 2.展开槽的饱和 为避免“边缘效应”，在薄层板用展开剂蒸气饱和有时是必要的。 3.展开距离 常规薄层最长展距为20cm;高效薄层展距最长为10cm。 4.展开温度 * 展距对结果的影响，硅胶HPTLC 分离洋甘菊油，a）3 cm、b）5 cm、c）7 cm、d）9 cm。 展距对结果的影响 * (六)薄层层析的定性检测 展开完毕后，把薄层从层析缸中取出，用铅笔划出或小针刺出展开剂前缘的位置，随即进行显色，以确定各个斑点的位置、Rf值和显色情况，从而判断试样中含有哪些组分。 有色物质经展开后呈现明显的色斑，很易判断。 对于无色物质，可根据化合物的性质，用物理检出法、化学检出法、酶与生物检出法和放射性检出法进行显色。 1 物理检出法 1 .紫外光 一般来说，对于未知化合物，展开后在用显色剂以前，都应先在紫外灯下进行察看。紫外光常用两种波254nm与365nm。 如果化合物能吸收紫外光同时放出荧光，可用此荧光定位。 2. 碘 元素碘的最大特点是与物质的反应往往是可逆的，当化合物定位以后在空气中放置时，碘即升华挥去，可以回到组分的原来状态，有利于薄层的进一步处理。 3. 水 水可作为一种非破坏性显色剂，用于硅胶薄层，当许多憎水性化合物展开后，用水喷薄层板，对光观察，在半透明的薄层板上，显出白色不透明的斑点。 2.化学检出法 化学检出法是在薄层上使用一种或数种化学试剂与被检出物质反应，生成有颜色的化合物而定位。这种试剂叫显色剂。 显色剂 一般分为两类，即通用显色剂和专属性显色剂。 1 通用显色剂 (1) 浓硫酸或50%的硫酸溶液：极大多数有机