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2017-10-05 发布于湖北
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陕北绒山羊基因的敲除

学号：2010010742 2014届本科生毕业论文（设计）题目: CRISPR/Cas9系统介导陕北绒山羊MSTN基因的敲除学院(系)：动物科技学院专业年级：动物科学101班学生姓名：陈晓旭指导教师：曾文先教授合作指导教师：陈玉林教授完成日期： 2014年6月目录摘要1 第一章文献综述3 1.1 前言3 1.2 陕北白绒山羊3 1.2.1 产区与分布3 1.2.2 体型外貌3 1.2.3 生产性能3 1.3 CRISPR/Cas9系统4 1.3.1 CRISPR/Cas9系统的结构4 1.3.2 CRISPR/Cas9系统的作用原理4 1.3.3 CRISPR/Cas9系统的运用5 1.4 MSTN基因的研究6 1.4.1 MSTN基因的结构、定位与同源性分析6 1.4.2 MSTN基因的生物学功能6 1.4.3 MSTN基因在肌肉中表达的研究进展7 1.4.4 MSTN基因多态性的研究进展7 第二章试验部分9 1 材料与方法9 1.1 试验动物9 1.2 试验试剂与所需溶液9 1.2.1 一般试剂9 1.2.2 分子生物学试剂9 1.2.3 试验所用试剂配置9 1.3 试验仪器与设备10 1.4 试验方法与步骤10 1.4.1 羊的同期发情与超数排卵10 1.4.2 胚胎RNA注射及移植10 1.4.3 基因组DNA 的提取10 1.4.3.1 羊羔的组织采样10 1.4.3.2 羊羔的基因组提取11 1.4.4 MSTN基因的引物设计合成及稀释12 1.4.5 目的基因的PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测12 1.5PCR产物的纯化12 1.6 T7核酸内切酶酶切检测14 1.6.1 PCR纯化产物的退火14 1.6.2 T7核酸内切酶酶切及电泳检测14 1.7 纯化产物与T载体的连接14 1.7.1 纯化产物的加A尾过程14 1.7.2 加A尾后DNA产物与T载体的连接14 1.8 T载体转化感受态细胞(DH5α)15 1.9 单克隆的挑取及测序15 1.10 测序结果的分析15 2 结果及分析16 2.1 胚胎移植结果16 2.2 T7核酸内切酶检测结果16 2.2.1 羊羔信息及采样16 2.2.1.1 羊羔信息16 2.2.1.2 采样信息17 2.3 基因组的提取17 2.4 目的条带的扩增17 2.5 PCR产物的纯化18 2.6 目的片段的T7核酸内切酶酶切18 2.7 DNA 目的片端与T载体的连接及转化18 2.8 挑单克隆及测序20