液相色及谱法.ppt

* * * * * * * * * * * * * * 四、选择流动相时应注意的几个问题： （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（HPLC级试剂） （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 9.3.2 液相色谱流动相 主 要 内 容 9.1 高效液相色谱的特点与仪器 9.2 基本原理与主要分离类型 9.3 固定相与流动相 9.4 液相色谱的应用 9.5 离子色谱法 9.4 液相色谱的应用 9.4.1 影响分离的因素 9.4.2 液相色谱的应用 9.4.3 液相制备色谱 在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即： H = A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。 一、影响分离的因素与提高柱效的途径： 9.4.1 影响分离的因素 液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 9.4.1 影响分离的因素 H = A + C·u 二、流速： 流速大于0.5 cm/s时，H～u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。 9.4.1 影响分离的因素 三、固定相及分离柱： 9.4.1 影响分离的因素 9.4.2 液相色谱的应用 9.4.3 液相制备色谱 9.4 液相色谱的应用 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：示差折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 9.4.2 液相色谱的应用 一、环境中有机氯农药残留量分析： 二、多环芳烃的分析： 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 9.4.2 液相色谱的应用 9.4.1 影响分离的因素 9.4.2 液相色谱的应用 9.4.3 液相制备色谱 9.4 液相色谱的应用 获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。 9.4.3 液相制备色谱 半制备型（柱内径8mm，长度15~30cm，一次制备量毫克级） 制备型（柱内径20~50mm，柱长50cm，制备量达到克级） 对分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量； 超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。 超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。 9.4.3 液相制备色谱 一、色谱柱的柱容量（柱负荷）： 二、液相制备色谱的方法： 收集组分时，通常有以下两种情况： （1）可获得良好分离，主峰 使用制备柱，超载提高效率； （2）两主成分之间的小组分； 超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。 9.4.3 液相制备色谱 三、制备型液相色谱： 制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。 9.4.3 液相制备色谱 主 要 内 容 9.1 高效液相色谱的特点与仪器 9.2 基本原理与主要分离类型 9.3 固定相与流动相 9.4 液相色谱的应用 9.5 离子色谱法 9.5 离子色谱法 9.5.1 离子色谱法原理 9.5.2 离子色谱装置类型 9.5.3 离子色谱的应用 离子色谱法 (Ion Chromatogra