五毛细及管电泳.pptVIP

一.概述 电泳是电解质中带电粒子在电场力作用下，以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象.利用这种现象对化学和生物化学组分进行分离的技术称之为电泳技术。丛20世纪30~40年代起 ,相继发展了多种基于抗对流介质的电泳技术(如纸电泳，凝胶电泳等).传统的电泳技术由于受到焦耳热的限制，只能在低电场强度下进行电泳操作，分离时间长，效率低.80年代初,细径毛细管被用于电泳，由此产生了一种新型的分析技术——毛细管电泳。 毛细管的结构：毛细管电泳通常使用内径为25-100μm的弹性（聚酰亚胺）涂层熔融石英管。 毛细管的特点是：容积小；侧面/截面积大而散热快、可承受高电场；可使用自由溶液、凝胶等为支持介质；在溶液介质下能产生平面形状的电渗流。 原理 毛细管电泳(CE)又称高效毛细管电泳(HPCE),是指离子或带电粒子以毛细管为分离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。由于毛细管内径小，表面积和体积的比值大,易于散热， 因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生,这是CE和传统电泳技术的根本区别。 根据分离原理分为以下几种类型 ①毛细管区带电泳（capillary zone electrophoresis，CZE）； ②毛细管等速电泳（capillary chromatography，CITP）； ③毛细管胶速电动色谱（miceller electrokinetic capillary chromatography，MECC）； ④毛细管凝胶电泳（capillary gelelectrophoresis，CGE）； ⑤毛细管等电聚焦（capillary isoelectric focusing ，CIEF）。 二.毛细管电泳基本概念和原理 毛细管电泳的基本原理： 毛细管电泳是以高压电场（30kV）为驱动力，以毛细管为分离通道。其管内填充了缓冲液或凝胶，根据样品中各组分之间淌度和分配的差异而实现分离的一类液相分离技术。  在电泳过程中，毛细管两端插入电极液，此电极液通常与管中的缓冲液一致。正负电极连接至高电压装置，进样时样品盘移动，使毛细管的进样端及此端的电极准确插入样品管中，给予一定电场或压力后，样品被吸入毛细管内，然后再将毛细管移至电极液中开始电泳。 在毛细管电泳中，为了维持电荷平衡，溶液中的正离子吸附至石英表面形成双电子层，当在毛细管两端施加电压后，这层正离子趋向负极移动，并带动毛细管中的溶液以液流形式移向负极（电渗）?。 由于毛细管的表面积与体积比大，加上电泳时使用了高压，电渗在毛细管电泳中具有两大特点：液体沿着毛细管壁均匀流动，其前沿是平的；携带不同电荷的分子朝一个方向移动，中性分子也能随着电渗一起移动而实现分离  2.毛细管电泳基本分离原理 三.毛细管电泳的分离模式 毛细管电泳的分离模式 （一）毛细管区带电泳（capillary?zone?electrophoresis，CZE?）： 毛细管和电极槽内充有相同组分和相同浓度的电解质溶液（缓冲液）。它是最基本、应用最普遍的一种分离模式，尤其对于亲水多肽的分离具有一定的优越性。 （二）微团电动毛细管色谱（micellar?electrokinetic?capillary?chromatography，MECC）： 通常有一些离子型表面活性剂（如SDS）加到缓冲液中，这类分子一端为亲水基团，其余部分为疏水内核，亲水基团在表面，中性粒子因其本身疏水性不同而得以分离。 毛细管电泳的分离模式 （三）毛细管等电聚焦（capillary?isoelectric?focusing，CIEF）： 选用内壁中性共价涂层消除电渗的毛细管，利用两性电解质形成pH梯度。CIEF具有较高的分辨力。 （四）毛细管筛分电泳（capillary?sieving?electrophoresis，CSE）： 在毛细管内填充了多聚物作为分离介质，如甲基纤维素对分子的泳动起着阻碍作用。其作用机制类似平板电泳凝胶的筛网作用，大分子较小分子所受的阻碍大，泳动速度减慢。 毛细管电泳的分离模式 （六）毛细管阵列电泳（capillary array electrophoresis，CAE）：CAE是在常规CE原理和技术的基础上，结合微型制造技术设计出来的一种检测技术由微通道或反应池等构成通道型微阵列芯片，通过加载生物样品，进行一种或连续多种反应，达到快速高效分析的目的，是一种新型的生物芯片。 （七）免疫亲和毛细管电泳（immunoaffinity capillary electrophoresis，ACE）：ACE是把蛋白质（抗原或抗体）事先固定在毛细管柱内，利用抗原-抗体的特异性识别反应，CE的高效、快速分离能力，LIF的高