北京农学院生理实验指导.pdf

北 京 农 学 院 [ 自编教材指导书] 《植物生理学》实验指导 李奕松 姬谦龙 厉秀茹 葛秀秀 王文平 编 北京农学院生物技术学院 2011.2 目 录 实验一 质壁分离法测定细胞渗透势 1 实验二 小液流法测定植物组织水势 2 实验三 植物根系活力的测定（TTC 法） 4 实验四 过氧化氢酶（CAT ）活性的测定 6 实验五 植物材料硝酸还原酶活性的测定 8 实验六 叶绿体色素的提取、理化性质及定量测定. 10 实验七 植物细胞膜透性的测定 13 实验八 植物光合速率的测定 14 《植物生理学》实验指导 实验一 质壁分离法测定细胞渗透势 一、原理： 在生活细胞和外界溶液构成的渗透体系中，水分总是从高水势一方流向低水势一方。将 植物组织放入一系列不同浓度的蔗糖溶液中，经过一段时间以后，有的细胞吸收水分，细胞 膨胀；有的失去水分，细胞发生质壁分离。如果在某一溶液中细胞脱水达到平衡时刚好细胞 处在初始质壁分离状态，此时细胞内的压力势等于零，外界溶液的渗透势等于细胞渗透势， 故此外界溶液称为该组织的等渗溶液，其浓度称之为该组织的等渗浓度。根据公式即可计算 出该组织细胞液的渗透势。在实际测定时，由于临界质壁分离状态难以在显微镜下直接观察 到，所以一般均以细胞初始质壁分离状态作为判断组织等渗浓度的标准。如果细胞质壁分离 较为明显，可根据引起质壁分离的溶液浓度，与相邻的不引起质壁分离的溶液浓度，取其平 均值，求出组织等渗浓度，并计算出溶液的渗透势，即为该组织细胞的渗透势。 二、材料与设备： 1.植物材料：洋葱鳞茎、大葱、蚕豆叶片或其它植物叶片。 2.设备：显微镜1 台、培养皿7 套；滴管；载玻片、盖玻片各5 片；镊子1 把；单面刀 1 片；滤纸适量。 3.试剂：1.00 mol/L 蔗糖溶液，0.03% 中性红溶液. 三、实验步骤： 1. 以1.00 mol/L 蔗糖溶液为母液,依照公式C V =C V 配制0.30、0.40、0.50、0.60、0.70 1 1 2 2 mol/L 蔗糖溶液各10ml 于干燥清洁的小培养皿内备用。注意盖上培养皿盖，防止蒸发浓缩。 2. 用刀片在洋葱鳞茎内表皮上划出边长为5mm 的小方格，用镊子剥取内表皮数块浸入 盛有 0.03% 中性红溶液的小培养皿内，染色 3min，取出后放入盛有自来水的小培养皿内冲 洗中性红在细胞间隙、细胞壁等上面的浮色，用滤纸吸干内表皮上的多余水分。 3.在盛有不同浓度蔗糖溶液的培养皿内分别放入染过色并漂洗后的内表皮数块。20— 30min 后，按从高浓度到低浓度蔗糖溶液的顺序各取出内表皮小块，依次开始镜检，绘图记 录质壁分离情况，求出组织细胞的等渗溶液浓度。 四、结果计算： 由所得到的组织细胞的等渗浓度和测定时的室温，用下式计算植物细胞的渗透势。 Ψs= -iCRT （MPa ） Ψ：为细胞渗透势，以MPa 表示。 S i ：为溶液的等渗系数（蔗糖溶液的i=1 ）。 C ：等渗溶液的浓度（mol/L ）。 T ：为绝对温度，T= （273+t ℃）K，t 为实验时的室温。 R ：为气体常数，R=0.008314 （L·MPa/mol ·k） 1 《植物生理学》实验指导 实验二 小液流法测定植物组织水势 一、原理 水势表示水分的化学势，水分从水势高处流向低处。植物体细胞之间、组织之间以及植 物体和环境之间的水分移动方向都由水势决定。 当植物细胞或组织分别放在一系列浓度递增的溶液中时，如