PCR技术的简介及检验.pdf

PCR技术的简介 孙涛 PCR技术简史 PCR的基本原理 PCR检验 发展史 PCR技术简史 PCR仪变迁 Kary Mullis 发展史 PCR技术简史 PCR仪变迁 1985年10月25 日，申请了PCR的专利， 1987年7月28 日批准（专利号4683202 ）， 这次MULLIS是第一发明人； 1986年6月，CETUS公司纯化了第一种 高温菌DNA聚合酶，Taq DNA 聚合酶； 1988年，第一台PCR仪问世。 Kary B. Mullis The Unusual Origin of the Polymerase Chain Reaction 1989年美国 《Science》杂志列PCR 为十余项重大 科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣 获1993年度诺贝尔化学奖。 发展史 PCR仪的变迁 PCR仪变迁 手动/机械手式水浴基因扩增 自动化控制型定性基因扩增仪 终点定量/半定量扩增仪 实时定量扩增仪 手动/机械手式水浴基因扩增 94℃ 30s 55℃ 45s 72℃ 60s PCR循环 实时荧光定量PCR仪 扩增时间为2小时 一次扩增数量96人 份 PCR反应条件 PCR的基本原理 PCR过程 PCR的特点 标准的PCR反应体系 引物 酶 4种dNTP混合物 模板DNA Mg2+ PCR反应条件 PCR的基本原理 PCR过程 PCR的特点 1 2 3 高温变性 低温退火 适温延伸 重复1~3步 94 25~30轮 温 形 D 度 72 N 成 目的DNA片