第四章 基因功能研究.pdf

基因工程 第四章 基因工程在基因 功能研究中的应用 湖南师范大学生命科学学院 袁婺洲 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 本章目录 4.1 基因表达谱研究技术 4.2 基因突变研究技术 4.3 基因敲除与基因敲减技术 4.4 基因过表达与异位表达技术 4.5 基因相互作用研究技术 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 第一节、基因表达谱研究技术 • 胚胎原位杂交技术 • 胚胎抗体染色技术 • 基因芯片技术 • 蛋白质组学技术 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 一、胚胎原位杂交技术 • 胚胎原位杂交技术简称原位杂交（in situ hybridization， ISH），是利用碱基互补配对的原理，用带有标记的目的 DNA或 RNA片段作为核酸探针,与胚胎或组织内的mRNA进行 杂交，然后通过放射自显影、荧光显微镜观察或酶促底物 显色的方法予以显示，确定目的基因的mRNA的存在与定位 情况。 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 1、原位杂交探针 +链探针与-链探针两 种 探针较长500-1000bp 荧光或酶间接标记 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 2 、胚胎原位杂交结果 果蝇心脏发育基因tinman在胚胎发育不同时期的原位杂交结 果。果蝇胚胎时期见标注。胚胎呈侧面观，头部在左，尾部 在右。背部在上，腹部在下。8期胚胎显示tinman基因在整 个中胚层表达，9期胚胎显示tinman只在背部中胚层表达， 10期胚胎显示tinman局限于心脏前体细胞中表达。 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 二、胚胎抗体染色技术 • 胚胎抗体染色技术（antibody staining）是利用固定 剂将胚胎、组织或细胞固定，用特异性抗体进行抗原 抗体免疫反应，一抗与目的蛋白结合后，再与二抗特 异性结合，利用二抗连接不同的酶或荧光基团，就可 以通过显色反应或荧光检测确定目的基因的蛋白在胚 胎或组织内的定位与表达情况。 一抗与二