第三章 酶的分离纯化技术20130225.pdf

第三章 酶的分离纯化技术 陈 中 粮食、油脂与蛋白质工程 华南理工大学轻工与食品学院 1 ① 组织及细胞的破碎 ② 酶的提取 ③ 酶的粗分离 ④ 酶的柱层析技术 ⑤ 亲和柱层析 ⑥ 离心技术 ⑦ 电泳技术 ⑧ 酶的鉴定 2 分离提纯的基本程序主要包括三部分：  前处理：①，②；  粗分离：③；  细分离：④，⑤，⑥；  ⑦可以是分离，也可以是鉴定；  ⑧贯穿全分离纯化的全过程。 3 前处理 • 材料的选择 • 组织细胞破碎 • 缓冲液提取 • „„ 4 粗分离 • 盐析法 • 等电点沉淀法 • 有机溶剂沉淀法 • 膜分离和层析法 • „„ 5 细分离 • 细分离也就是进一步纯化，常用方法包括： • 凝胶过滤柱层析、离子交换柱层析、吸附柱 层析、亲和柱层析、毛细管柱层析、生物磁 的应用、酶结晶、区带电泳、毛细管电泳、 等电聚焦电泳等技术。 6 整个纯化过程中需要注意的事项： 保持低温、降低酶水解酶作用； 避免泡沫形成，防止表面变性； 逐步监测酶活性，跟踪酶的去向、分析提纯 效果，包括：酶含量测定和酶纯度及功能性 鉴定等。 7 一、组织及细胞的破碎 8 （一）机械法  组织捣碎  研磨  挤压 9 （二）化学法  化学法即利用有机溶剂处理的方法。  有机溶剂如乙醇、丙酮或甘油可破坏细胞 结构。 10 （三）物理法  干燥法  反覆冻融法  超声波振荡法  渗透压冲击法  …… 11 （四）酶法 即用酶处理细胞壁或细胞膜。 12 操作过程注意事项： 1. 过程中的温度应尽可能地降低，一般地应使操作温度接近于溶剂的 冰点。既可避免酶的变性，也可防止细菌的感染； 2. 必须小心控制酸碱度，使其酸碱度尽可能接近于天然酶的酸碱度， 防止酶因pH值改变而变性； 3. 酶的浓度应尽可能保持浓稠； 4