极具潜力的昆虫表达平台.pdf

极具潜力的真核蛋白表达平台极具潜力的真核蛋白表达平台 极具潜力的真核蛋白表达平台极具潜力的真核蛋白表达平台 —— 默克默克Novagen® 昆虫表达系统工具进展简介昆虫表达系统工具进展简介 默克默克 昆虫表达系统工具进展简介昆虫表达系统工具进展简介 Vicky Qi March, 2011 蛋白表达平台蛋白表达平台 蛋白表达平台蛋白表达平台 原核表达系统原核表达系统 原核表达系统原核表达系统 昆虫表达系统昆虫表达系统 昆虫表达系统昆虫表达系统 酵母表达系统酵母表达系统 酵母表达系统酵母表达系统 真核表达系统真核表达系统 真核表达系统真核表达系统 昆虫细胞表达系统成为受人关注的首选平台昆虫细胞表达系统成为受人关注的首选平台 昆虫细胞表达系统成为受人关注的首选平台昆虫细胞表达系统成为受人关注的首选平台 基因组大基因组大：：外源插入片段可达外源插入片段可达12kb12kb；；可构建同时表达多个基因的载体可构建同时表达多个基因的载体 基因组大基因组大：：外源插入片段可达外源插入片段可达1212kbkb；；可构建同时表达多个基因的载体可构建同时表达多个基因的载体 灵活的表达方案灵活的表达方案：：早期或晚期启动子表达效果不同早期或晚期启动子表达效果不同 灵活的表达方案灵活的表达方案：：早期或晚期启动子表达效果不同早期或晚期启动子表达效果不同 能获得重组蛋白高水平的表达能获得重组蛋白高水平的表达：：最高可达到细胞总蛋白的最高可达到细胞总蛋白的50％50％ 能获得重组蛋白高水平的表达能获得重组蛋白高水平的表达：：最高可达到细胞总蛋白的最高可达到细胞总蛋白的5050％％ 有较完善的翻译后加工过程有较完善的翻译后加工过程：：绝大多数产物具有生物活性绝大多数产物具有生物活性 有较完善的翻译后加工过程有较完善的翻译后加工过程：：绝大多数产物具有生物活性绝大多数产物具有生物活性 可用于蛋白晶体研究可用于蛋白晶体研究 可用于蛋白晶体研究可用于蛋白晶体研究 技术简便技术简便、生产成本低、生产成本低、无病原性、无病原性：：遗传学上是安全的遗传学上是安全的，用于医药产品开发，用于医药产品开发 技术简便技术简便、、生产成本低生产成本低、、无病原性无病原性：：遗传学上是安全的遗传学上是安全的，，用于医药产品开发用于医药产品开发 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 （AcNPV ） Autographa californica Nuclear Polyhedrosis Virus 杆状病毒感染昆虫细胞杆状病毒感染昆虫细胞 杆状病毒感染昆虫细胞杆状病毒感染昆虫细胞 杆状病毒启动子杆状病毒启动子 杆状病毒启动子杆状病毒启动子 极早期极早期/早期启动子早期启动子：：ie, gp64 极早期极早期早期启动子早期启动子：： 晚期晚期/极晚期启动子极晚期启动子：：polh，，p10 晚期晚期极晚期启动子极晚期启动子：： ，， 传统制备重组杆状病毒的方法传统制备重组杆状病毒的方法 传统制备重组杆状病毒的方法传统制备重组杆状病毒的方法 Plate cells 3 days Co-transfect 3 days Pick plaques 3 days repeat Plaque purify 3 times 3 days Generate high titer stock 实际应用对昆虫表达系统的新要求实际应用对昆虫表达系统的新要求 实际应用对昆虫表达系统的新要求实际应用对昆虫表达系统的新要求 多系统穿梭方便快速选择最合适的表达系统多系统穿梭方便快速选择最合适的表达系统 多系统穿梭方便快速选择最合适的表达系统多系统穿梭方便快速选择最合适的表达系统 快速筛选快速筛选最佳表达载体和宿主细胞及发酵条件的组合 快速筛选快速筛选 平行操作多个样品平行操作多个样品，以获得最佳的重复性 平行操作多个样