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几个小麦大小粒品种中酯酶、过氧化物酶和α-淀粉酶与粒重的相关性 严海燕1 2 2 张开旺 徐乃瑜 1中国科学院武汉植物园 武昌，磨山 430074 2武汉大学生命科学院 武昌，珞珈山 摘要 我们采用不同千粒重的小麦品种，在不同发育时期进行酯酶、过氧化物酶和α-淀粉酶 同工酶酶谱的分析，研究它们与千粒重的关系。研究结果表明，与千粒重直接有对应关系的 是乳熟期种子中的α-淀粉酶的 B 带，它在所有大粒品种中存在，而在所有小粒品种中不存 在。乳熟期种子中的α-淀粉酶的 C 带、酯酶的 A 带、萌动胚中α-淀粉酶的 F 、H 、I 带有可 能参与多种基因对粒重的控制过程，而起间接作用。 关键词：过氧化物同工酶、酯酶同工酶、α-淀粉酶、千粒重 小麦的粒重是一个与产量密切相关的农艺性状，受多基因控制。酯酶、过氧化物酶是 植物 体内具有多方面生理功能的酶。其同工酶分析广泛用于发育、品种鉴定、杂种分析、病理分 析等方面。α-淀粉酶参与淀粉代谢，在粒重性状方面可能有重要影响，本研究针对小麦粒重 的一对性状，对几个不同粒重的品种进行同工酶分析，以期找到规律性的酶带。 1 材料和方法 材料：大粒小麦品种：红芒、视察 15、野园=野生二粒 x 园锥F5 小粒小麦品种：小荆早 21 、火烧百日、软杆洋麦 田间工作： 所有材料于 11 月 11 日在田间播种， 22 日出苗。株距5cm,行距 25 cm 。分别在拔节期、 乳熟期、完熟期取材制样。 样品制备： 萌动胚：每品种取 60 粒，在 17°C 温箱内浸种 24h 。取露白种子切胚制样，每 10 粒种胚 加蒸馏水 0.5ml 室温下研磨，经 3500rpm 离心 20 分钟，取上清液，按 1：1 加 10%甘油，于 -10°C 冰箱中保存。 芽鞘：每品种取 80 粒，于 20°C 温箱内浸种萌发。第一片真叶即将露头时切取芽鞘制样。 按每 10 个芽鞘加蒸馏水 0.4ml 研磨制样，方法同上。测量 20 株芽鞘的长度求其平均值。 节和节间：田间材料拔节期，取茎长 9-20cm 的植株节和节间制样。统计 20 株茎长。按 每克加 3ml 蒸馏水制样，方法同上。 乳熟种子：取乳熟后期种子，每 10 粒种子加蒸馏水 0.5ml 研磨制样，方法同上。 完熟种子：取完熟期种子，每 10 粒种子加蒸馏水 1ml 研磨制样，方法同上。 同工酶检测和酶活测定方法： 本实验采用的同工酶分析分离法均为聚丙烯酰胺凝胶垂直薄板电泳[1] 。酯酶采用的缓冲系 统为低离子强度的Tris-柠檬酸缓冲系统（.pH8.9），凝胶浓度下层胶为7.3%，上层胶为2.5% ， 电极缓冲系统为低离子强度的Tris-Gly系统（pH 8.7 ）。每样槽点样 80μl和 1 滴溴酚蓝。电泳 电压为200-260v/每板，时间3~4 小时。染色用 1mg/ml的醋酸-α-奈酯加 1mg/ml 的坚牢蓝（RR 盐）,在染液中 37°C染色 10~15 分钟，即可出现棕色酶带。 过氧化物酶采用Tris-HCl缓冲系统下层胶浓度为 7%（pH 8.8 ）, 上层胶浓度为 4% （pH 6.8 ）。 电极缓冲液系统为高离子强度的Tris-gly系统（pH 8.8 ）。每样槽点样 80μl和 1 滴溴酚蓝。电 泳电压为每板 100~200v，稳压电泳。电泳时间 11~18h。 染色采用 1mg/ml的联苯胺加少量 的 30%H O (1.0g+ 9 ml 冰醋酸+dH O 40 ml + 0.3%H O 50 ml ) ，室温下染色半分钟到一分 2 2 2 2 2 1 钟，看到酶带显兰色，即取出放入流水中冲洗过夜，酶带渐变成亮棕色。 α-淀粉酶采用的缓冲系统、凝胶浓度、电极缓冲系统、电泳时电压、时间都与酯酶相同。 不同处仅在于在凝胶中加有 7%可溶性淀粉及 Na2SO4 （2% ）。染色前先用保温液冲洗一下， 在保温液中（36C ）保温半小时。保温液为Ca、Na 的醋酸缓冲液（pH