生物工程中游技术实验三-四.pdfVIP

现象 解决方案？ “好”方案？ 问题的提出？ 实验3 无菌操作及植物愈伤组织诱导 实验3 无菌操作及植物愈伤组织诱导 、胚胎培养技术 、胚胎培养技术 1 目的 ■初步掌握植物explant消毒、接种的无菌操作技术 ■学习explant愈伤组织诱导方法及成熟胚培养操作 技术 2原理 ►植物组培是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官或组织，甚 至单个细胞的过程 ►获得无菌材料，是取得组培成功最基本前提和重要保证 ►植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上，通过脱分化， 形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团—愈伤组织 ►胚培养是植物有性杂交育种/远缘杂交育种的重要辅助手段 3实验材料、器具与药品 材料： 新鲜的胡萝卜块根、柚果种子等 器具: 药品: 4 实验内容 准备工作 ？ explant表面消毒 ？ 接种 ？ ？ 培养 观测 ？ 5、实验报告 第12周交上来！ 污染原因和预防措施 污染：混入培养环境中对细胞生长有害的成分和造成细 胞不纯的异物，包括生物，化合物质及细胞 •污染对培养细胞可能有致命的影响 a.空气：流动性大，造成不洁空气污染 ◆微生物 b.器材：培养器皿、器械，CO2培养箱 污染途径 c.操作：无菌观念不强。 d.组织样本： ▲污染对细胞的影响 •培养细胞一旦发生污染多数将无法挽回 ▲轻度时即使去除污染物，可能恢复 ▲ 重度会引起细胞增殖停止 ▲ 不同污染物对细胞的影响有差别 细菌污染 •表现： •发酵状 •水渍状 •滴形云雾状 •污染原因： •培养基灭菌不过关 •接种器具污染 •操作污染 •交叉污染 可用青/链霉素预防 真菌 真菌污染 •表现： •灰、白、黄、绿菌丝 体、孢子组成绒毛状 可用抗真菌剂预防 物有色圈 •污染原因： •培养室湿度过大 •瓶口积落有灰尘和孢子 几种常用消毒剂的效果比较 消毒时 消 毒 使用浓度 效 残液去 间 剂 (%) 果 除难易 (min.) 次氯酸钙/ 10 5～30 好 易 钠 新洁尔灭 10～20 5～30 好 易 氯化汞 0.1～1 2～10 最好 最难 过氧化氢 10～12 5～15 较好 最易 抗菌素 4～50mg/L 30～60