在定量PCR仪上使用ROX校正的优点.PDFVIP

在定量PCR仪上使用ROX校正的优点 定量PCR使用ROX校正的优点 ● 在运行中校正可能由气泡或蒸发/浓缩造成的信号变化 ● 提供功能强大的故障诊断工具：被动校正信号，不受反应的影响，而且 在运行的每个循环中收集信号 ● 在一个运行中校正可能由加样或可能的蒸发造成的体积差别 ● 在多个运行间校正体积的差别，提供运行之间更一致的Ct值 由于使用ROX具有以上优点，所以AB 的定量PCR仪都支持ROX校正，并且AB 的 Master Mix也都加有ROX。客户可以在AB 的定量PCR仪上选择使用或是不使用 ROX。 2 Apr, 2009 © 2009 Applied Biosystems ROXTM校正在一个运行中的信号变化 Multicomponent图谱显示出逐渐增高的ROX信号，说明存在蒸发 3 Apr, 2009 © 2009 Applied Biosystems “管家荧光” ROX R = R / R n Reporter ROX 校正取样误差 减少孔间差异 4 Apr, 2009 4 © 2009 Applied Biosystems ROXTM提供功能强大的故障诊断工具 ● 通过观察ROX信号值进行故障诊断，如： – 没有ROX说明漏加了Master Mix – 较大的ROX信号差别，说明可能有些孔多加了一份Master Mix – 不规则的ROX信号变化提示可能存在硬件故障 5 Apr, 2009 © 2009 Applied Biosystems ROXTM校正体积差别 6 Apr, 2009 © 2009 Applied Biosystems Experiment One: 要获得高精度结果并不是必须要用ROXTM 在7500 Fast系统上使用RNase P仪器校验板的反应结果，使用和不使用ROX的结 果，Ct的SD值显示分别为0.042和0.108 。 7 Apr, 2009 © 2009 Applied Biosystems Experiment Two: ROXTM校正移液错误 在RNase P校验板中使用0.5、1.0和1.5μL ddH O取代等体积转移的样本，使用和不 2 使用ROX得到的Ct的SD值分别为0.075和0.174 。 8 Apr, 2009 © 2009 Applied Biosystems Experiment Three: 在定量反应中ROXTM校正可确保精确的 结果 使用和不使用ROX校正得到 的标准曲线可得到几乎相当 2 的结果，R 值分别为0.997和 0.99 9 Apr, 2009 © 2009 Applied Biosystems Experiment Three: 在定量反应中ROX