荧光定量PCR实验原理及数据分析.pdf

荧光定量PCR实验原理及数据分析 Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Marketing Dep. 冯彩宁 内容概要  荧光定量PCR的原理  荧光定量PCR的标记方法  荧光定量PCR解析方法  荧光定量实验流程及注意事项  生工荧光定量产品选择指南 2 荧光定量PCR原理－－定义 实时定量PCR技术： 利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩 增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进 行定量分析 与常规PCR技术比较： 对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析，无法对起 始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测 3 荧光定量PCR原理－－常用名词概念  扩增曲线  荧光阈值  Ct值 4 荧光定量PCR原理－－扩增曲线 平台期 荧光基团 ） 度 强 光 Lg－liner phase 荧 （ n R Baseline 荧光检测元件 Cycle （循环数） 5 荧光定量PCR原理－－荧光阈值 平台期  前15个循环信号作为荧光本底 信号（baseline）  荧光阈值的缺省设置是3～15个 ） 度 循环的荧光信号的标准偏差的 强 光 Lg－liner phase 10倍 荧 Threshold （  手动设置:大于荧光背景值和阴 n R 性对照的荧光最高值；进入指 数期的最初阶段  真正的信号:荧光信号超过阈值 Baseline Cycle （循环数） 6 荧光定量PCR原理－－Ct值 Ct值的定义： ） 度 PCR扩增过程中，扩增产物 强 光 的荧光信号达到设定的阈值