新城疫病毒地分离鉴定.docVIP

青岛农业大学 兽医微生物学课程论文 题 目： 新城疫病毒的分离家鉴定 姓 名： 王梅州 学 院： 动物科技学院 班 级： 马业科学1201班 学 号： 任课教师： 温建新 二0一四 年 四 月 十五 日  新城疫病毒的分离鉴定 马业科学1201 王梅州 任课教师 温建新 摘要：病毒的分离鉴定在兽医研究中长用于禽源病毒的分类、培养、生物学特性鉴定、疫苗制备和药物筛选等工作。是防疫、确诊病毒类疾病的重要手段。 关键词：新城疫病毒 接种 鸡胚 引言：鸡胚的优点是，来源充足价格低廉，操作简单，无需特殊设备和条件，乙肝病毒谱较广，对接种病毒不产生抗体等。 新城疫是禽类的一种急性、高度接触性传染病，由一种侵害呼吸道、肠道以及中枢神经系统的新城疫病毒引起。NDV属于副黏病毒科的腮腺炎病毒属成员，有囊膜，表面有纤突，内含血凝素神经氨酸酶和融合蛋白。NDV有血凝特性，能凝集禽类、两栖动物、爬行动物等多种动物的红细胞以及人的O型红细胞。  目录 摘要 I 关键词 I 引言 I 1 材料 1 1.1 鸡胚 1 1.2 病毒 1 1.3 实验试剂 1 1.4 实验器材 1 2 实验方法 1 2.1鸡胚的选择和孵育 1 2.2 鸡胚接种前的准备 1 2.2.1照蛋 1 2.2.2 消毒 1 2.3 鸡胚接种 1 2.4 接种后的观察 1 2.5 微量α法血凝抑制试验 2 3 结果观察 2 4 结论 3 参考文献 3 1 材料 1.1鸡胚 9-11日龄SPF或非免疫ND疫苗种鸡所产的白壳鸡蛋 1.2 病毒 待捡病毒液 1.3 实验药剂 NDV阳性血清、1％％℃温箱中孵育。 2.4 接种后的检查 接种后每天检查3-4次。接种后24h内死亡的鸡胚多数是由于鸡胚受损或污染细菌引起的，一般弃去。但有些病原微生物（如高致病力禽流感病毒）也可能会在短时间内引起鸡胚死亡，只是应对可疑尿囊液做进一步鉴定。 2.5 微量α法血凝抑制试验 取洁净的96孔V形微量滴定板用微量移液器从滴1孔至第12孔各加生理盐水50μL。用微量移液器吸取尿囊液50μL，加入第1孔并吸吹3-5次，使其与生理盐水充分混匀后依次倍比稀释至第11孔，弃去50μL，第12孔不加病毒液作为对照，做相同的2排。后用液器向第一排的1-12孔各加50μL的生理盐水。第二排没空各加一定稀释度的新城疫阳性血清50μL，后在第一排和第二排每孔各加１％℃或室温静置15-20min，待对照孔完全沉淀后判定并记录结果。 结果判定：血凝实验结果以++++（#）、+++、++、+和—表示。 ++++（#）：红细胞均匀平铺与V型孔底。 +++：红细胞平铺孔底，但孔中心稍有红细胞聚集。 ++：孔周围有凝集，孔中央有红细胞聚集。 +：孔中央有红细胞聚集形成小团，但边缘不光滑，四周有小凝块。 —：孔中央有红细胞聚集，边缘光滑。 血凝实验第一排和α法血凝抑制试验（第2排）两排孔的血凝价相差2个滴度以上判为阳性，即判定待检病毒为新城疫病毒；如两排孔的血凝价相 等或差异小于2个滴度者为非特异性凝集，或为其他病毒引起，应判为阴性。 3 结果观察 将反应板倾斜成45℃角，沉于管底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。? ?能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价，用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数(log2)表示。如上例，该血清的红细胞凝集抑制效价为1：64