LAMP法介绍.pdf

Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP)(LAMP) LAMPLAMP法为已知基因的检测提供法为已知基因的检测提供 “简便、快速、准确、廉价” 的基因检测方法。 ★利用该方法「简便」、「廉价」的特性、可将基因检测推广至尚未普及的领域与地区。 ★为满足基因检测或基因扩增的现场（例如病房临床现场检测）「快速」（30分钟以内）获 得结果的需求得结果的需求，，我们提供了我们提供了一种种 「「简便简便」、「」、「准确准确」」的基因检测扩增技术的基因检测扩增技术。。 什么是LAMP法？ ■LAMP法 LAMP法是“Loop-Mediated Isothermal Amplification”的简称、是荣研化 学独立研发可取代PCR的一种“简便、快速、准确、廉价”的基因扩增方法。 LAMP法的特征是针对目标DNA链上的六个区段设计四个不同的引物然后再利 用链置换反应在用链置换反应在一定温度下进行反应定温度下进行反应。反应只需要把基因模板反应只需要把基因模板、引物引物、链置换型链置换型DNADNA 合成酶、基质等共同置于一定温度下 （60～65℃）、经一个步骤即可完成。扩增效率 极高，可在15分~1小时内实现109～1010倍的扩增。而且由于有着高度的特异性，只需 根据扩增反应产物的有无即可对靶基因序列的存在与否作出判断。 ■特征 ●不需要使双链DNA先变性成单链。 ●扩增反应在等温下可持续进行。 ●扩增的效率极高。 ●针对六个区段使用四种不同的引物，可特异性扩增靶基因序列。 ●仅使用一种链置换型DNA聚合酶，成本低廉。 ●●扩增产物是在扩增产物是在同同一条条DNADNA链上互补序列周而复始形成大小不链上互补序列周而复始形成大小不一的结构的结构。。 ● 当模板是RNA时，仅需加入逆转录酶即可与DNA一样进行扩增。 1 ■引物的设计 首先在靶基因的3’末端设定F3c、F2c、F1c三个区段，在5’末端设定B1 、B2 、B3三 个区段。针对这六个区段我们设计了如下四个引物。 FIP 5 F1c F2 3 F3 F3 55 33 Primer F3c F2c F1c Target DNA B1 B2 B3 3 5 5 3 F3 F2 F1 B1c B2c B3c B3 3 5 Primer B3 33 B2