生物科技职业学院教案第页课题实训五菠萝蛋白酶的制备一.DOC

生物科技职业学院教案（第 页） 课题 实训五：菠萝蛋白酶的制备（一） 教学要求与目标 目标：1、了解单宁沉析法提取菠萝蛋白酶的原理基本操作技术。原理 教具与 材料 自编《生物分离技术实训指导书》 教学内容与设计： 组织教学：点名，检查学生的出勤人数 1 min 实训导入：酶提取菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶，广泛存在于菠萝果实、芽、叶、茎中，能分解蛋白质、肽、酯和酰胺，其成品为浅黄色、无定形粉末，稍溶于水，不溶于乙醇、丙酮、氯仿、乙醚，最适pH值为7，微有异臭，其酶活力能被半胱氨酸激活，而受重金属抑制。可广泛用于干酪、明胶、水解蛋白的生产；也可作为一种食品添加剂，使肉质嫩化、啤酒澄清；还可以治疗生物体内水肿及多种炎症，能迅速溶痂，对正常组织无害，适用于中小面积深度烧伤的治疗。 本实训采用以鲜菠萝为原料，用单宁沉析法提取其中的菠萝蛋白酶。所用的乙二胺四乙酸根是一种螯合物，可有效地螯合原料中重金属离子，以避免其与酶结合而使酶失去活性；抗坏血酸则具有还原性质，分子上的活泼羟基氢可使酶活性中心保持还原状态，从而有效地保护酶活性；锌离子、硫代酸钠、L-半胱氨酸对酶有激活作用。酶湿品于-15℃以下冻结后，体积膨大，便于干燥，有利于保护其活性。1）了解单宁沉析法提取菠萝蛋白酶的原理。 黑龙江生物科技职业学院教案（第 页） 教学内容与设计： （二）试剂及器具 1、材料 鲜菠萝0.5％、0.1％EDTA-Na（二乙胺四乙酸钠）；0.5％乙酸锌溶液；0.06％、0.1％抗坏血酸溶液；％单宁（别名鞣酸）；1.5％氯化钠溶液；0.5％硫代硫酸钠溶液；1％L-半胱氨酸溶液配制：称取L-半胱氨酸0.1g，加水10mL，加lmol／L盐酸溶液6～8滴使之溶解用6mol／L的氢氧化钠溶液中和至pH3～4。榨汁机、大烧杯（≥500 mL）、磁力搅拌器、恒温水浴锅、搪瓷桶、酸度计、离心机、容量瓶、pH试纸、冰箱、干燥器、板框压滤机压榨 取鲜菠萝1500g，去刺、洗净，用压榨机压出汁液，取1000g鲜菠萝汁，加5％苯甲酸钠溶液10mL搅匀，用于防腐。 除杂 鲜菠萝汁离心（3000r/min）20 min（或送入板框压滤机），除杂质。 黑龙江生物科技职业学院教案（第 页） 教学内容与设计： 教学提示 黑龙江生物科技职业学院教案（第 页） 教学内容与设计： 教学提示 黑龙江生物科技职业学院教案（第 页） 教学内容与设计： 教学提示 黑龙江生物科技职业学院教案（第 页） 教学内容与设计： 教学提示 课后作业与练习： 课后记： 黑龙江生物科技职业学院教案（第 页） 课题 实训五：菠萝蛋白酶的制备（二） 教学要求与目标 目标：1、了解单宁沉析法提取菠萝蛋白酶的原理基本操作技术。原理菠萝蛋白酶提取操作技术 教具与 材料 自编《生物分离技术实训指导书》 教学内容与设计： 组织教学：点名，检查学生的出勤人数 1 min 实训导入 ：有机酸沉析的特点 2 min 实训五：菠萝蛋白酶的制备 二、实验过程 82 min （三）添加稳定剂 将澄清液移入搪瓷桶中，在搅拌条件下，加入0.5％EDTA-Na 80、0.1％的抗坏血酸溶液60。 单宁 立刻加入％的单宁100mL，在4℃下静置1h，离心（3000 r/min）15 min弃去上清液，收集沉析物(酶复合物)。洗脱将沉析物倒入烧杯中，加0.5％乙酸锌溶液20 ，搅拌均匀，静止5min；加0.06％抗坏血酸溶液30mL，搅匀，静止10min；加1.5％氯化钠溶液20 ，搅匀，静止10min；最后再加0.5％EDTA溶液20，搅匀，静止5min；离心(3500r／min)10min，弃去上清液，得菠萝蛋白酶沉析物。 把上述沉析物倒入烧杯中，加0.5％硫代硫酸钠溶液20 ，搅匀，静止5min；加1％L-半胱氨酸溶液10，搅匀，离心（3500r／min）10min，弃去上清液，得菠萝蛋白酶湿品。 黑龙江生物科技职业学院教案（第 页） 教学内容与设计： （六）冷冻干燥 将菠萝蛋白酶湿品放入冰箱中，于-15℃冷冻10～15h，解冻后离心（3000r／min）10min，沉淀放入装有氯化钙或五氧化二磷的干燥器中干燥5～10h，取出后研磨成粉末，得菠萝蛋白酶纯品，低温（2～10℃）下保存。、注意事项 对原料的要选取70％～80％成熟度的新鲜菠萝。 提取操作中避免热、酸、碱、重金属盐、紫外线等