抗原抗体检测技术.PDF

抗原抗体检测技术 抗原与相应的抗体在体外相遇时可发生特异性结合，呈现某种反应现象。根据抗原的物 理性状及参与反应的物质不同可以分为凝集反应、沉淀反应及补体参与的各种反应等。 一、直接凝集 在玻片或其它支持物上，颗粒性抗原（细胞、细菌等）与相应抗体在有适量电解质存在 时，直接结合可形成肉眼可见的凝集块。该方法简便，快速，为定性试验，常用于鉴定抗原。 （一）玻片凝集-ABO 血型鉴定 根据人红细胞表面ABO 血型抗原和人血清中ABO 抗体，可将人血型分为A 型、B 型、 O 型和AB 型。A 型：有A 抗原，抗B 抗体；B 型：有B 抗原，抗A 抗体；AB 型：有A 和B 抗原，无抗A 抗B 抗体；O 型：无A 和B 抗原，有抗A 和抗B 抗体。检测红细胞表 面ABO 血型抗原，标本为红细胞，称为正定型。检测人血清中抗A 、B 抗体，标本为血清， 称为反定型。 1、正定型 ⑴材料： ①红细胞标本：采静脉血。 ②抗体试剂：抗A 、抗B 血型抗原单克隆抗体（血凝效价256 ，亲合性少于15 秒）。 ③生理盐水。 ④器材：玻片、小试管、小巴氏管、小吸球、无菌注射器、止血带、牙签、记号笔、酒 精棉球、碘酒棉球等。 ⑵方法： ①取一块玻片或瓷砖片，按下表标记划格，每块板可以检测5 人。 红细胞标本 试 剂 1 2 3 4 5 抗A 抗体 抗B 抗体 抗原型别 ②取试管，装入 1 ml 生理盐水。皮肤消毒后，静脉抽血1ml，滴2 滴入试管中（余下 静置，留取血清，做反定型用），混匀。 ③取盐水稀释后的血液滴在玻片的相应上下格中，各1 滴。 ④滴抗 A 、抗B 单克隆抗体试剂各一滴于相应的上下格中，立即用牙签搅匀红细胞及 抗体。搅抗A 和抗B 格时要用牙签的不同端。 ⑤5 秒钟内就可形成凝集物。要在3 分钟内观察结果并记录。出现凝集的记＋，无凝集 的记－，出现凝集的即为该标本所有的ABO 血型抗原。 2 、反定型 ⑴材料： ①红细胞试剂：ABO 同型血2～3 人份混合，生理盐水洗涤3 遍后，制备成2%红细胞 生理盐水悬液。 ②被检血清标本：见正定型方法2 。 ③用正定型材料（3 ）和（4 ）。 ⑵方法： ①玻片或瓷砖片，按下表标记划格。 血清标本 红细胞 1 2 3 4 5 A 型 B 型 抗体型别 ②取血清标本分别滴入上下相应2 个格中，各1 滴。 ③分别滴A 和B 型红细胞于相应格中。 ④立即用牙签搅匀血清和红细胞。用牙签的不同端搅匀A 和B 红细胞。 ⑤3 分钟内观察结果，出现凝集的记为＋，无凝集的记为－，出现凝集者即为血清中含 有的ABO 抗体。 3、试验结果判定： 红 细 胞 标 本 1 2 3 4 抗A ＋ － － ＋ 抗B － ＋ － ＋ 血 清 标 本 A 细胞 － ＋ ＋ － B 细胞 ＋ － ＋ － 血 型