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IL23、 IL17在桥本氏甲状腺炎患者甲状腺组织中表达
IL23、 IL17在桥本氏甲状腺炎患者甲状腺组织中表达
作者:吴汉妮, 余玲, 屈新才, 钱伟, 肖波
【摘要】 目的: 检测桥本甲状腺炎(HT)甲状腺组织中白细胞介素(IL)23、 IL17的表达, 并探讨IL23/IL17在HT免疫病理中的作用。方法: 采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和Western blot方法, 检测20例HT患者和15例正常甲状腺组织中IL23p19、 IL17mRNA和蛋白的表达水平。结果: RTPCR显示IL23p19、 IL17mRNA在HT甲状腺组织中的平均表达水平分别为1.0154±0.5749、 0.5952±0.2513, 正常对照组的表达水平分别为0.0929±0.0242、 0.1537±0.0855; 两组比较, HT患者甲状腺组织IL23p19、 IL17mRNA的表达水平显著高于正常对照(Plt;0.05); 且在HT中, IL23p19和IL17mRNA的表达存在正相关(Plt;0.01, r=0.861)。Western blot检测显示IL23p19、 IL17蛋白在HT甲状腺组织中的平均表达水平明显高于正常对照(Plt;0.05)。结论: IL23、 IL17在HT患者甲状腺组织中的协同过表达, 提示IL23/IL17可能参与了HT的免疫病理过程。
【关键词】 桥本甲状腺炎; 白细胞介素23; 白细胞介素17
桥本甲状腺炎(hashimoto thyroiditis, HT)是器官特异性自身免疫性疾病, 确切的发病机制仍未清楚。目前较为一致的观点认为, 在遗传素质与环境因素相互影响的基础上, 机体免疫系统紊乱是导致HT发病的主要原因。传统理论认为, 自身反应性T细胞在HT的免疫机制中起关键作用。近期研究发现, 机体存在一种新的CD4+ T细胞亚型Th17, 产生IL17具有IL23依赖性[1-3]。相关研究表明, IL23/IL17与自身免疫病关系密切[4-6]。本研究拟通过检测HT患者甲状腺组织中IL23p19和IL17的表达水平, 探讨IL23/IL17在HT发病中的作用。
1 对象和方法
1.1 研究对象 2006-03/2007-06在华中科技大学同济医学院甲状腺手术的HT患者甲状腺样本20例(其中男6例, 女14例), 年龄37~54岁, 平均(44.17±9.33)岁, 均因甲状腺肿出现气管压迫症状或疑诊为甲状腺癌施行手术, 术后病理证实为桥本甲状腺炎。15例甲状腺腺瘤旁的“正常”甲状腺组织作为对照(其中男5例, 女10例), 年龄35~56岁, 平均(45.33±9.41)岁, 经病理证实无肿瘤细胞的浸润。
1.2 方法
1.2.1 逆转录聚合酶链反应(RTPCR) 根据GenBank人IL23p19、 IL17的cDNA序列设计引物, 以GAPDH作为内参照。引物序列由上海英俊公司合成: IL23p19: 5′ACAACTGAGGGAACCAAACCA3′, 5′CAGCAGCAACAGCAGCATTAC3′; IL17: 5′GGCTGGAGAAGATACTGGTGT3′, 5′TTTAGTCCGAAATGTAGGCTGT3′; GAPDH: 5′AGTCAGCCGCATCTTCTTTT3′, 5′GAGTCCTTCCACGATACCAA3′。取甲状腺组织, 用TRIzol(Invitrogen公司)提取总RNA, 并逆转录为cDNA(Promega公司)。通过预实验确定各项检测指标的PCR反应条件和最适循环数, 以保证PCR产物量与起始cDNA量呈线性相关。IL23p19、 IL17的PCR反应条件: 94℃ 5 min, 1循环; 94℃ 45 s, 54℃ 45 s, 72℃ 45 s, 35循环; 72℃ 7 min, 1循环; 产物长度均为172 bp。GAPDH: 94℃ 5 min, 1循环; 94℃ 45 s, 53℃ 45 s, 72℃ 45 s, 35循环; 72℃ 7 min, 1循环; 产物长度575 bp。取4 μL PCR产物电泳, SensiAnsys凝胶图像分析系统分析电泳条带的光密度值, 用相对光密度值代表mRNA的表达量。相对光密度值=(IL23p19或IL17光密度值/GAPDH光密度值)×100%。
1.2.2 Western blot检测 取甲状腺组织标本, 单去污裂解液提取组织蛋白, 考马斯亮蓝法测蛋白浓度。每例标本取50 μg蛋白样品进行SDSPAGE电泳, 转膜, 然后用含30 mL/L牛血清白蛋白的T
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