大豆花芽差异表基因片段GmFBDG01克隆.PDF

吉林农业大学学报　 ２０１５，３７（５）：５４３～５４８ ｈｔｔｐ：／ ／ ｘｕｅｂａｏ．ｊｌａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｊｌｎｄｘｂ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ 大豆花芽差异表达基因片段 ＧｍＦＢＤＧ０１克隆 和 ＲＮＡｉ表达载体的构建∗ １ ２ １∗∗ ２ １ １ 潘丽丹 ，姚　 丹 ，王丕武 ，刘婷婷 ，郑成忠 ，赵翠兰 １．吉林农业大学农学院，长春 １３０１１８；２．吉林农业大学生命科学学院，长春 １３０１１８ 摘　 要：大豆的产量构成因素中每荚粒数是提高大豆产量的育种关键因素，因此研究与荚粒数相关的基因至 关重要，花芽作为植物生殖生长的第一步，对大豆植株的生长发育有着重要的影响，可能对四粒荚的产生有影 响。 以大豆吉农１８ 四粒荚突变体的７ 叶期花芽的转录组测序结果进行分析，筛选出差异表达的片段ＧｍＦＢ⁃ － ＤＧ０１；利用ＲＴ ＰＣＲ克隆差异表达基因的ＣＤＳ核心序列，并借助中间克隆载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ ｐｌｕｓ，成功构建 了ＲＮＡ干扰（ＲＮＡｉ）表达载体ｐＣＰＢ⁃ＧｍＦＢＤＧ０１⁃ＲＮＡｉ，该表达载体的构建为大豆四粒荚相关功能基因的功能 验证奠定基础。 关键词：大豆； 四粒荚突变体；花芽；差异表达；ＲＮＡ干扰；表达载体构建 中图分类号：Ｓ３３６；Ｑ７８　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 文章编号：１０００⁃５６８４（２０１５）０５⁃０５４３⁃０６ ＤＯＩ：１０．１３３２７／ ｊ．ｊｊｌａｕ．２０１５．２５２７ 引文格式：潘丽丹，姚丹，王丕武，等．大豆花芽差异表达基因片段ＧｍＦＢＤＧ０１克隆和ＲＮＡｉ 表达载体的构建 ［Ｊ］．吉林农业大学学报，２０１５，３７（５）：５４３⁃５４８． Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ＧｍＦＢＤＧ０１ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ Ｂｕｄ ａｎｄ Ｃｏｎ⁃ ｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＲＮＡ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒ １ ２ １ ２ １ ＰＡＮ Ｌｉｄａｎ ，ＹＡＯ Ｄａｎ ，ＷＡＮＧ Ｐｉｗｕ ，ＬＩＵＴｉｎｇｔｉｎｇ ，ＺＨＥＮＧ Ｃｈｅｎｇｚｈｏｎｇ ，ＺＨＡＯ Ｃｕｉ⁃ ｌａｎ１ １．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｏｎｏｍｙ，ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３０１１８，Ｃｈｉｎａ；２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３０１１８，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｓ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｓｔｅｐ ｏｆ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｐｌａｎｔｓ，ｆｌｏｗｅｒ ｂｕｄ ｈａｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． Ｃｈｏｏｓｉｎｇ ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｂｕｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｖｅｎｔｈ ｃｏｍ⁃ ｐｏｕｎｄ ｌｅａｆ ｉｎｓｏｙｂｅａｎｆｏｕｒ⁃ｇｒａｉｎｐｏｄｍｕｔａｎｔｓｏｆｊｉｎｏｎｇ １８ａｓｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ ａｎａｌｙｚｅｄａｎｄｃｏｍ⁃ ｐａｒｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓ ｃｒｉｐｔｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ． ＧｍＦＢＤＧ０１ｃｏｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ － ｇｅｎｅｗａｓｃｌｏｎｅｄｂｙ ＲＴ ＰＣＲ，ａｎｄ ｓｏｙｂｅａｎ ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓｐＣＰＢ⁃ＧｍＦＢＤＧ０１⁃ ＲＮＡｉ ｗｅｒｅ