第9章 吸光光度法 (工).pptVIP

* 9.4.3 吸光度读数范围的选择 光度计的读数误差一般为0.2～2％(ΔT),由于T与浓度c不是线性关系，故不同浓度时的ΔT引起的误差不同。 100 80 60 40 20 0 T% ?c1 ?c2 ?c3 ?T ?T ?T-透光率读数误差 c ?c1 c1 ?c2 c2 ?c3 c3 * 吸光光度法中，仪器测量不准也是误差的主要来源。 A=-lgT=εbc ⑴ 透过率读数误差DT基本是个常数，因为T的标尺是均匀的， DT是由仪器刻度读数不可靠引起的误差，和T的大小无关 吸光度读数误差DA是随着A的不同而变化，因为A的刻度标尺是不均匀的，DA随着A的增大而增大 * 不同的吸光度数值A下，吸光度读数误差带来的测定浓度误差dc/c是不同的 * 假设△T为0.5%，绘制不同透过率下浓度相对误差变化曲线如图9-16（p254）：T过高或过低，dc/c都是很大的，T在适宜的范围内测量误差才是可以接受的 利用（9-5）公式令其导数为零，求出：T=0.368（A=0.434）浓度误差最小，约为±1.4%。 * 10 8 6 4 2 0 20 40 60 80 0.7 0.4 0.2 0.1 A T% Er (36.8) 0.434 浓度测量的相对误差与T(或A)的关系 实际工作中，应控制T在70 ～ 10 ％, A在0.15～1.0之间 (调c, b, ?) * 调整比色皿厚度和取样量等达到 ★浓度误差大小和T/A的读数范围有关： T=70～10% / A=0.15～1.0时， 浓度测量误差为1.4-2.2%； 如果要求准确度高些， 可控制T=65-20% /A=0.2-0.7 * 吸光光度法的应用 1. 单一组分测定 （标准曲线法） 1) 金属离子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟, Co-钴试剂 2) 磷的测定: DNA中含P～9.2%, RNA中含P～9.5%, 可得核酸量. H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3 =(NH4)3PO4·12MoO3+12NH4NO3+12H2O 磷钼黄(?小) Sn2+ 磷钼(V)蓝(?大) * 2. 多组分的测定 a)在?1处测组分x, 在?2处测组分y b) 在?1处测组分x; 在?2处测总吸收,扣除x吸收,可求y c) x,y组分不能直接测定 P254 A1= εxl1 bcx+ εyl1 bcy (在?1处测得A1) A2 = εxl2 bcx+ εyl2 bcy (在?2处测得A2) εxl1, εyl1, εxl2, εyl2由x,y纯液 在?1, ?2处分别测得 * 3) 蛋白质测定—溴甲酚绿、考马司亮蓝等 4) 氨基酸测定—茚三酮(紫色化合物) 5) 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+---- 6) 药物含量测定—比吸光系数定量；荷移光谱法测定. 7) 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。 * 4.配合物组成的测定 3.一元弱酸离解常数的测定 5. 双波长分光光度法消除干扰 6. 导数分光光度法 * * 9.2 光度计及其基本部件 P242 9.2.1 分光光度计的类型 * 光电二极管阵列(通常具有316个硅二极管) photodiode arrays (PDAs) 同时测量200～820nm范围内的整个光谱, 比单个检测器快316倍,信噪比增加 316 1/2 倍. 多通道仪器（Multichannel Instruments） 其他类型分光光度计 将光度计放入样品中, 原位测量. 对环境和过程监测非常重要. 纤维光度计 * 镀铝反射镜 纤维光度计示意图 * 纤维光度计 * 9.2.2 光度分析的几种方法 1.目视比色法 观察方向 c4 c3 c2 c1 c1 c2 c3 c4 方便、灵敏，准确度差。常用于限界分析。 * 2. 光电比色法 通过滤光片得一窄范围的光(几十nm) 光电比色计结构示意图 灵敏度和准确度较差 * 3. 吸光光度法和分光光度计 通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光. 波长可调, 故选择性好, 准确度高. 光源 单色器 吸收池 检测系 统 稳压电源 分光光度法的基本部件 * 滤光