刺五加中紫丁香苷提取分离及抗肿瘤作用探究.docVIP

刺五加中紫丁香苷提取分离及抗肿瘤作用探究 　 作者：汪琢，姜守刚，祖元刚，付玉杰，张宇 【摘要】 目的研究紫丁香苷的体内外抗肿瘤作用。方法应用MTT法观察紫丁香苷对体外培养的4种人癌细胞的抑制作用，构建S180实体瘤小鼠模型研究紫丁香苷的体内抗肿瘤作用。结果紫丁香苷对体外培养的4种人癌细胞有一定的抑制作用，并且能抑制小鼠S180实体瘤。结论紫丁香苷具有一定的体内外抗肿瘤活性。 【关键词】 紫丁香苷; 提取分离; 抗肿瘤作用; MTT; 小鼠 　刺五加为五加科植物刺五加Acanthopanax Senticosus (Puper.et Maxim) Harms 的干燥根及根茎,主要分布在我国的黑龙江、吉林、河北、山西、宁夏、陕西及四川等地，朝鲜、俄罗斯远东地区及日本北海道等地亦有分布和种植[1]。刺五加具有益气健脾、补肾安神之功效, 主要用于脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦等病症[2]。此外，国内外对刺五加的药理作用研究还表明，刺五加可增强机体非特异性防御能力，除具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射损伤及抗疲劳等作用外，还可治疗心脑血管疾病、糖尿病、神经衰弱等症[3]。刺五加的根和茎部分含有多种活性化学成分, 到目前为止，分离出的重要成分为苷类化合物。紫丁香苷为β-谷甾醇葡萄糖苷，是一种较为典型的苷类化合物[4]，对它的研究主要集中在含量测定，而药效学研究并不多见，文献报道其有降血脂[5，6]和增强免疫力作用(张勇.《紫丁香苷的测定及其降血脂增强免疫力的研究》.2004吉林大学硕士学位论文)，对心肌缺血的保护(张迪.《刺五加皂苷单体B对大鼠急性心肌缺血的保护作用》.2006东北师范大学硕士学位论文),抗氧化[7]以及抗抑郁[8]等作用。本实验从刺五加根茎中提取分离紫丁香苷，进行了结构确认，并在此基础上对紫丁香苷进行了抗肿瘤作用研究。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器CO2 培养箱, 美国SIM 公司;TS-100 倒置显微镜, 日本Nikon 公司;DL-CJ-2N 生物洁净工作台, 哈尔滨市东联电子技术开发有限公司; Stat Fax-3200 酶标仪 ,美国AWARENESS 公司;1-15K高速冷冻离心机, 德国Sigma 公司;BS110 电子天平, 美国Sartorius 公司; 3102型电子天平,辽宁龙腾电子有限公司;DK-8D 型电热恒温热水槽 ,上海森信实验仪器有限公司;一次性针头式滤器, 美国Pall Life Sciences 公司;Milli-Q 超纯水系统, 美国Millpore 公司;MDF-U32V 超低温冰箱, 日本SANYO 公司;PB-21 PH 计, 美国Sartorius 公司;accu-jet 电动移液器 ,德国Brand 公司;吉尔森Gilson 移液器 ,法国Gilson 公司;LDZX-40BI 型立式自动电热压力蒸气灭菌器, 上海申安医疗器械厂;X-4数字显示显微熔点测定仪(温度未较正)，北京泰克仪器有限公司制造;旋光用WZZ-1S型数字自动旋光仪，上海浦东物理光学仪器厂;液相质谱仪 API3000 ，加拿大Applied Biosystems公司; AV-300核磁共振波谱仪(TMS内标，300 MHz)，美国Bruker公司;Waters 600 半制备液相(Waters2996二极管阵列)，美国Waters公司; HYPERSIL C18 ( 4.6 mm×150 mm 5 μm)色谱柱，美国Waters公司;RE-52AA旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂。 　　1.2 药品0.9%的生理盐水,哈尔滨三联药业产品; RPMI1640培养基, 美国Hyclone 公司产品;胰蛋白酶 ，美国Gibco 公司产品;EDTA， 美国Sigma 公司产品;MTT(噻唑蓝)， 美国Sigma 公司产品;小牛血清， 天津灏洋生物制品科技有限责任公司产品;96 孔培养板， 加拿大JET 公司产品;二甲基亚砜(DMSO)， 美国Amerseco 公司产品;青霉素、链霉素， 美国Hyclone 公司产品; 甲醇(色谱级、分析纯)、其他试剂均为分析纯，青岛海洋化工厂产品;环磷酰胺，江苏恒瑞制药厂产品。 　　1.3 动物昆明种小鼠，雄性18～22 g,由哈尔滨医科大学肿瘤医院提供;荷肉瘤S180小鼠，由哈尔滨医科大学肿瘤医院传代培养。 　　1.4 肿瘤细胞株人宫颈癌Hela细胞、乳腺癌MCF-7 细胞、肺癌A549 细胞和前列腺癌PC-3 细胞购于哈尔滨医科大学。 　　2 方法 　　2.1 紫丁香苷的提取分离称取刺五加干粉3 kg，过60目筛，加入甲醇回流提取3次，3 h/次，固液比分别为(1∶9，1∶8，1∶8) ,过滤,合并滤液,回收甲醇,得总浸膏。总浸膏加10倍量水超声振