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大青杨纤维素合酶(PuCesA7)cDNA的克隆及反义表达载体的构建
分子植物育种( 网络版), 2011 年, 第9 卷, 第1847-1850 页 Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1847-1850 http://mpb. 5 研究资源 A Resource 大青杨纤维素合酶(PuCesA7) cDNA 的克隆及反义表达载体的构建 1 1 2 许雷 , 刘一星 , 方连玉 1 东北林业大学生物质材料科学与技术教育部重点实验室, 哈尔滨, 150040 2 东北林业大学林学院, 哈尔滨, 150040 通讯作者: xulei_fly@126.com 作者 分子植物育种, 201 1 年, 第9 卷, 第 116 篇 doi: 10.5376/.201 1.09.0 116 收稿日期:201 1 年10 月08 日 接受日期:201 1 年10 月20 日 发表日期:201 1 年11 月17 日 这是一篇采用Creative Commons Attribution License 进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用, 版权所有人允许并同意第三方无条 件的使用与传播。 引用格式( 中文) : 许雷等, 2011, 大青杨纤维素合酶(PuCesA7) cDNA 的克隆及反义表达载体的构建, 分子植物育种(online) Vol.9 No.116 pp. 1847-1850 (doi: 10.5376/ .2011.09.0116) 引用格式(英文) : Xu et al., 2011, Cloning of a cDNA Fragment Encoding a Cellulose Synthase (PuCesA7) and Construction of Antisense Expression Vector, Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding) Vol.9 No.116 pp. 1847-1850 (doi: 10.5376/.2011.09.0116) 摘 要 本研究提取大青杨叶片总RNA,经RT-PCR 扩增得到约 1.3 kb 的cDNA 片段,将其克隆到pMD18-T 载体。经测 序,该片段长1 304 bp,与欧洲颤杨PtrCesA7 全长cDNA 序列比对,核苷酸相似性为97%。克隆到载体上的PuCesA7 片段 用Sac Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切,反向插入到植物表达载体pROK Ⅱ的P35S 启动子和Tnos 终止子之间,成功构建pROK Ⅱ-P7 Sac Ⅰ Kpn Ⅰ反义表达载体。利用该植物表达载体对大青杨的遗传转化正在进行中,以确定PuCesA7 基因的初步功能。 关键词 大青杨; 纤维素合酶; 反义表达载体 Cloning of a cDNA Fragment Encoding a Cellulose Synthase (PuCesA7) and Construction of Antisense Expression Vector 1 1 2 Xu Lei , Liu Yixing , Fang Lianyu 1 Key Laboratory of Bio-Based Material Science and Technology, Northeast Forestry University, Harbin, 150040, P.R., China 2 College of Forestry , Northeast Forestry University , Harbin, 150040, P.R., China Corresponding author, xulei_fly@126.com; Authors Abstract A cDNA fragment encoding a cellulose synthase (PuCesA7) was amplified by Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)
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