第二讲 血脂、脂蛋暗淖及载脂蛋白测定.pptVIP

血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定;一、血脂测定;;;;（二）血清总胆固醇测定 胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素D3胆汁酸，并构成细胞膜成分，TC包括FC（1/3）和CE（2/3），胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。 TC测定方法很多，约200多种，分为化学测定法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。;1、化学测定法 主要有两类 （1）Liberman-Burchard反应 简称L-B反应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。 （2）Zak反应 胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后在Fe3+存在下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度较L-B反应高7倍，且呈色稳定性好，但试剂腐蚀性极大，不能用于自动化分析。 ;2、酶法 胆固醇酯 胆固醇 ＋ 脂肪酸 胆固醇 ＋ O2 胆烷-4-烯-3酮 ＋H2O2 H2O2 ＋ 4AAP ＋酚 红色亚胺醌 ＋ H2O;【参考范围】3.10～5.70mmol/L 【临床意义】血清TC含量受年龄、性别、饮食和运动等因素的影响。①20岁以上随年龄↑而↑，70岁以后则有下降趋势。②20～40岁阶段男性高于女性，但女性绝经后则高于男性。③城市人群高于农村人群，与饮食和运动有关。④脑力劳动者高于体力劳动者。 病理性高胆固醇血症 原发性高胆固醇血症、糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲状腺功能减退。 病理性低胆固醇血症 严重贫血、甲亢、营养不良。 ;（三）血清甘油三脂测定 TG是有一分子甘油与三分子脂肪酸组成的化合物，主要存在于VLDL和CM中，临床化学中往往以测定甘油代表TG的含量。TG的测定方法很多，如气相色谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法。但上述方法需特殊的仪器设备和技术，故一般只用于研究工作中。临床实验室主要用化学法和酶法。 ;1、化学法 基本步骤可归纳为四步 （1）提取：甘油三脂的提取 采用合适的溶剂，使脂蛋白变性提取TG，同时去除干扰物质(磷脂、游离甘油、葡萄糖等),常用方法有： 1）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭土）吸附。 2）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。 3）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替正壬烷。应用较广。; （2）皂化：甘油三脂的水解 一般都采用KOH乙醇或KOH异丙醇溶液，60℃，5～15min可使TG完全水解。 （3）氧化：甘油的氧化 最常用的氧化剂是HIO4，甘油在酸性条件下被氧化成甲醛、甲酸。反应受α-磷酸甘油、葡萄糖、丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类物质的干扰。; （4）显色：显色测定甲醛。常用方法有： 1）甲醛与变色酸（4.5-二羟-2.7-萘二磺酸）在硫酸溶液中加热生成紫红色化合物。（570nm） 2）甲醛与乙酰丙酮在氨的存在下缩合成黄色的3.5-二乙酰-1.4-二氢-2.6-二甲基吡啶。（420nm）;2、酶法 常用的有： （1）磷酸甘油氧化酶法（GK-GPOD-POD法） TG ＋H2O 甘油 ＋ FA 甘油 ＋ ATP 3-磷酸甘油 ＋ ADP 3-磷酸甘油 ＋ O2 磷酸二羟丙酮 ＋ H2O2 H2O2 ＋ 4-AAP ＋ 酚 红色亚胺醌 ＋ H2O 试剂较稳定，灵敏度高，线性范围宽，胆红素、维生素C可消耗H2O2使结果偏低。;（2）乳酸脱氢酶法（GK-PK-LDH 法） TG ＋ H2O 甘油 ＋ FA 甘油 ＋ ATP 3-磷酸甘油 ＋ ADP ADP ＋ 磷酸烯醇式丙酮酸 ATP ＋ 丙酮酸 丙酮酸 ＋ NADH＋H+ 乳酸 ＋ NAD+ （3）甘油氧化酶法 第一步消除血清中原有的甘油： ;游离甘油 ＋ O2 甘油醛 ＋ H2O2 ;【参考范围】0.56～1.70mmol/L 【临床意义】血清TG一般随年龄增长而升高，体重超标者往往偏高。 1.病理性增高 原发性高脂蛋白血症、肥胖症、糖尿病、肾病综合症、脂肪肝、妊娠后期。 2.病理性降低 甲亢、肾上腺皮质功能减退、严重肝功能损伤。 ;(四)血清（浆）脂蛋白测定 1、血清脂蛋白电泳 临床实验室常用的支持介质有醋酸纤维薄膜和琼脂糖凝胶。 （1）血清脂蛋白醋酸纤维薄膜电泳