应用水痘-带状疱疹病毒报告细胞系定量带细胞病毒的探究.pdfVIP

应用水痘．带状疱疹病毒报告细胞系定量带细胞病毒的研究 中文摘要 【目的】 定量带细胞病毒(CAV)，以建立筛选抗VZV药物并研究其作用机制的新方法。 【方法】 克隆到高效表达质粒pCAGGS中构建BKvOka 应用双酶切和DNA测序法鉴定所构建质粒的正确性。 火虫荧光素酶(RLU)、用间接免疫酶法染色并计数病毒蚀斑(focusnumbers)、用 SYBR Green荧光定量PCR法检测病毒DNA拷贝数(DNA copies)，分别计算RLU／ 病毒蚀斑数和RLU／病毒DNA拷贝数的比值，分析其相关性，并建立RLU．病毒蚀斑数、 RLU．病毒DNA拷贝数和病毒DNA拷贝数．病毒蚀斑数的标准曲线。在培养基中加入 阿昔洛韦(ACV)以抑制病毒生长，再以相同方法建立ACV作用下RLU．病毒蚀斑数、 RLU．病毒DNA拷贝数和病毒DNA拷贝数一病毒蚀斑数的标准曲线。 为基数，根据绘制标准曲线时所得RLU／病毒蚀斑数和RLU／病毒DNA拷贝数比值推算 预测值与其实测值比较，以验证应用MV9G细胞定量CAV的可行性。 【结果】 ORF62 段与预期一致，VZV ORF62表达质粒pCAG。BKvOka62得以成功构建。 2 著相关(，．=0．936，尸0．05)。 值推算的病毒蚀斑数和病毒DNA拷贝数预测值与其实测值基本一致。 【结论】 检测VZVDNA提供了质粒模板标准品，为进一步应用VZV报告细胞系定量CAV奠 定了基础。 显著相关。根据RLU推算出的病毒蚀斑数和病毒DNA拷贝数的预测值与其实测值基 以反映病毒蚀斑数和病毒DNA拷贝数的变化。因此，应用MV9G细胞定量CAV是可 行的。 过程烦琐、难客观、易污染等缺点，具有简便、快速、敏感、客观和高通量的特点， 为迸一步建立抗VZV药物筛选和作用机制研究方法奠定了基础。 【关键词】 水痘．带状疱疹病毒报告细胞系抗病毒定量 英文摘要 cell—based ofcell—associated Reporter quantitation variceila·zostervirus ABSTRACT Iobjectivesl To constructan ofvaricella·zoster asa expressingplasmid virus(vzv)ORF62 standard control forreal-timefluorescence toestablisha plasmid quantitativePCR，and novel for cell—associated a celllinefor assay virus(CAV)州m VZV， quantifying reporter MV9G anaimtoscreenforanti—VZV andto itsantiviral cells，with compounds investigate mechanisms． 【Methodsl ofVZV ORF62