应用微阵列技术研究乳腺癌HER-2基因状态和蛋白的表达.pdfVIP

应用微阵列技术研究乳腺癌HER-2 基因状态和蛋白的表达 硕士生姓名： 马永权 指导教师： 张雪峰教授 指导小组： 蒋会勇 李瑾副教授 专业名称： 外科学 摘 要 目的： Micro TMAG)和细胞核微 应用组织微阵列组(TissuearrayGroup NMA)技术，通过免疫组化 阵列(NucleusMicroarray insitu (ImmunohistochemistryIHC)和荧光原位杂交(Fluorescence FISH)分别检测乳腺癌组织中HER。2基因状态和蛋白表达， hybridization 观察两种检测结果相互关系及临床意义。 材料和方法： 1．研究材料 收集沈阳军区总医院2006年6月～2008年8月诊断明确的乳腺癌标本， 共248例，均为女性，年龄31～84岁，平均48．3岁。 2．制作TMAG和IHC染色 将来源不同的(TissuemicroarrayTMA)切片排列在同一张载玻片上。 同时缩小相邻组织芯的距离，增加组织芯的数量，制成TMAG。采用S—P 法进行IHC染色。IHC染色结果参照美国FDA标准：光镜下观察以细胞 染色为阴性。 3．制作NMA和FISH染色 对石蜡包埋组织进行较厚的切片，经脱蜡及消化，从中提取出完整 的细胞核。将提取细胞核的悬液滴注在预制的石蜡模孔中，然后细胞核 固定、脱蜡便制成细胞核微阵列。NMA较好的适用于荧光原位杂染色。 FISH探针为混合探针，标记整个HER．2基因序列为橙色荧光；另一个 标记17号染色体着丝粒基因序列为绿色荧光。检测结果是列出20个间 期细胞核中HER．2拷贝数与着丝粒的比率，乳腺癌HER．2扩增的病例橙 色荧光与绿色荧光信号比率大于或等于2．0；正常的细胞核两种信号比率 小于2．O；结果在临界点(1．8～2．2)时应视为可疑。 4．统计学处理 2检验。 两种方法检测结果的相关性分析用．髓l1．5统计软件包进行x 结果： 1．IHC检测结果 248例乳腺癌标本中，IHC．为90例，IHC+为49例， 76 例，阳性率为29．0％。 2．FISH检测结果 248例乳腺癌病理标本中，FISH阴性l72例，FISH 阳性76例，FISH阳性率为30，6％。 3．IHC与FISH的结果比较 在IHC+++的72例中，有59例为FISH阳性； IHC一～++的1 76例标本中，有159例为FISH阴性。IHC与FISH检测结果总 符合率为87．9％，IHC与FISH检测结果两者之间存在显著性相关性。 IHC++与FISH检测结果无明显相关性(P0．01)。 4．1 7号染色体单体型染色体与多倍体型 IHC++中4例为l7号染色 体单体型染色体，其FISH检测均为阳性，占FISH阳性病例总数5．26％。IHC +++中5例17号染色体多倍体型染色体，FISH检测均为阴性，占FISH阴性 总例数2．9％。 结论 有结果同一性好、准确和低成本的优点。 致性。 是否为17号染色体单倍体，避免不必要的靶向治疗。 本研究的创新之处 l本实验把TMAG／NMA技术应用到普通石蜡包埋乳腺癌组织的IHC 和FISH检测，拓展了乳腺癌检测条件。 2．提出IHC++病例进行FISH检测，区分17号染色单倍体以免造成