应用WT1抗原肽体外刺激培养DC-CIK细胞杀伤K562细胞实验探究.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………．．1 英文摘要………．’…………………………………………………………．5 英文缩写…………………………………………………………………．．10 研究论文应用WTl抗原肽体外刺激培养。DC．CIK细胞杀伤K562细 胞实验研究 前言…………………………………………………………………．．11 日O舌……………………………………。……………………一……．．1l 材料与方法…………………………………………………………．．12 结果……………………………．．…………………………………．．17 附图…………………………………………………………………．．20 附表…………………………………………………………………．．22 讨{仑…………………………………………………………………．．24 结论…………………………………………………………．………．28 参考文献……………………………………………………………．．29 综述 白血病相关抗原诱导的细胞免疫治疗急性白血病研究进展…．．32 致谢………………………………………………………………………．．40 个人简历…………………………………………………………………．．41 万方数据 中文摘要 应用WTl抗原肽体外 刺激培养DC．CIK细胞杀伤．K562细胞实验研究 摘 要 目的：以WTl基因阳性的患者为研究对象，提取其外周血单个核细 胞，体外诱导产生树突状细胞(DC)，负载WTl复合抗原肽，体外诱导产 生细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)，检测DC细胞与CIK细胞的增殖能力、 的杀伤作用，探索收获WTl抗原特异性效应细胞的合理途径。 方法：DC细胞的培养：抽取WTl阳性白血病患者经肝素抗凝后的 外周血，经肝素抗凝后，用淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞(MYC， mononuclear 1640培养液将细胞浓度调整至5x106／ml， cells)。然后用RPMI 孵育4小时后，提取贴壁细胞，调整细胞浓度为5×106／ml加入6孔培养 板中，并加入细胞因子，使得重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 混合抗原肽，对照组DC细胞不负载WTl抗原肽，第6天，两组加重组 000U／ml，促进DC细胞成熟。 人肿瘤坏死因子一a(rhTNF．a)，使浓度为1 CIK细胞的体外培养：同上来源的细胞经过单个核细胞的分离，孵育 4小时后，收集悬浮的细胞，将细胞浓度调整至1×106／ml，加入干扰素．v monoclona l 以后隔日更换新的培养液并计数，同时补充加入rhIL一2。培育第7天，用 台盼蓝排斥法染色DC细胞和CIK细胞，计数活细胞，用完全培养基(含 浓度为5×106／ml，按照l：5比例混合，继续培养，在共培养的第1天、第 3天、第7天收集共培养细胞，计数，应用流式细胞术检测其免疫分子标 记，并检测其对靶细胞的杀伤活性。 结果： 万方数据 中文摘要 殖能力的比较 在温箱中孵育过的贴壁单个核细胞，经过GM—CSF和IL．4诱导后成 树突状细胞，倒置显微镜下观察细胞形态，培育中细胞外形发生变化，细 胞量亦有增加。培育48小时后细胞体积较前增大，表面有毛刺样突起， 随着培育时间的增长，细胞体积明显增大，细胞边缘毛刺样突起增多，变 长(见Fig．1)。 悬浮单个核细胞在相应细胞因子的诱导下扩增成CIK细胞，并逐渐 形成细胞团；CIK细胞最初，散在均匀分布，个小，亮而圆(见Fig．2)。在 培养的第3天，细胞形态开始呈现出不规则变化，并呈细胞团样生长(见 Fig．3)。从培养的第6天起，细胞明显增殖，成丛或以集落状态生长，并