应用shRNA敲减ILK对胶质瘤细胞系U251增殖、迁移、侵袭、肿瘤形成作用.pdfVIP

U.D.C: NO ADissertationfortheDegreeofM.Medicine TheeffectofknockdownILKbyshRNA ontheproliferation,migrationand invasionofhumangliomacellU251 Candidate: Wangguangyi Supervisor: Lichunhui AcademicDegreeAppliedfor: MasterofMedicine Specialty: Surgery University: HebeiUniversity DateofOralExamination: June,2015 摘 要 摘 要 目的：探讨应用shRNA敲减ILK后对人脑胶质瘤细胞U251增殖、迁移、侵袭及 体外肿瘤形成的影响 实验方法： 1）应用shRNA发转染人脑胶质瘤细胞U251系后获得稳定转染细胞株； 为了明确已经从转录及翻译水平均稳定敲减ILK表达水平，实验采用RT-PCR、 Westernblot U251 ILK mRNA 分别测定转染前后 人脑胶质瘤细胞中 的 以及其蛋白表达 情况； 2）shRNA-ILK对细胞增殖能力影响 ⑴应用CCK-8法检测定shRNA 转染后细胞吸光度值改变，进而了解敲减ILK后对 增殖速度的改变； ⑵流式细胞术（FC ）检测转染前后细胞增殖周期变化； ⑶免疫荧光法检测Ki67 的表达水平；为了明确细胞周期蛋白D1 （CyclinD1）的转 RT-PCR Westernblot 录及其蛋白表达水平，实验采用 、 分别检测。 3）shRNA-ILK对细胞迁移能力及侵袭能力影响 ⑴Transwell小室检测敲减ILK表达后，U251细胞迁移、侵袭能力的改变； ⑵免疫荧光法检测E-cadherin 的表达；RT-PCR、Westernblot分别检测E-cadherin、 Snail转录及其蛋白表达情况； 4）人脑胶质瘤U251裸鼠移植瘤模型建立和观测。 实验结果： ⑴稳定转染的U251细胞ILK 蛋白和mRNA表达水平明显下降； ILK U251 Ki67 Cyclin ⑵敲减 表达的 细胞株增殖、迁移及侵袭能力降低；与增殖（ 、 D1）、迁移及侵袭 （E-cadherin、Snail）相关的指标有明显变化，这些指标表达水平与对 照组比较均有显著性差异（P0.05）； ⑶应用shRNA敲减ILK表达细胞株裸鼠成瘤能力明显降低。 结论：应用shRNA敲减ILK表达的U251胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及成瘤 能力均显著降低，因此ILK可能是抑制胶质瘤的重要基因。 I 关键词 ILK shRNA 胶质瘤 增殖 迁移 侵袭 Abstract Abstract Objective: To investigate the change of proliferation, migration, invasion and tumorigenesis of human bra