小鼠骨髓树突状细胞的制备和其对胃癌细胞的杀伤作用研究.pdfVIP

氇_ 目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………一4 研究论文小鼠骨髓树突状细胞的制备及其对胃癌细胞的杀伤作用研究 前言………………………………………………………………………………………·8 刖吾………………………………………………………………………………………。萏 材料与方法……………………………………………………………9 结果…………………………………………………………………·13 附图……………………………………………………………………15 附表………………………………………………………………………………………·22 讨论………………………………………………………………………………………·23 结论………………………………………………………………………………………·28 参考文献………………………………………………………………29 综述树突状细胞及其肿瘤免疫…………………………………………32 致谢………………………………………………………………………“钒 个人简历……………………………………．．．………………………………·48 中文摘要 小鼠骨髓树突状细胞的制备及其对胃癌细胞的 杀伤作用研究 摘 要 目的：胃癌是全球肿瘤相关死亡的主要原因之一，是我国常见的恶性 肿瘤，占消化道肿瘤的50％--60％，严重危害着人类的健康，目前对胃癌 的治疗仍是以手术为主，辅以放、化疗的综合治疗，虽然疗效较过去有了 很大的改善，但总体效果仍不能令人满意。随着现代肿瘤免疫生物学和基 因工程技术的迅速发展，肿瘤免疫治疗中树突状细胞的作用成为研究的热 点。树突状细胞(dendriticcell，DC)是目前已知的功能最强的抗原呈提 cell，APC)，参与抗原的捕捉、加工、处理和提呈， 细胞(antigen．presenting Tcell)的抗原呈提细胞， 成熟的DC是唯一能激活幼稚T淋巴细胞(naive 在诱导高效而特异的抗肿瘤细胞免疫中起关键作用。 DC虽然广泛分布于机体所有组织器官中，但在外周血中含量极少，仅 占单核细胞总数的0．1％．10％，分离纯化困难，不能满足基础研究和临床 应用的需要，大量扩增高纯度DC是其研究的关键。为获得足够治疗量的树 突状细胞，近年来，开展了体外多种不同前体细胞沿不同分化途径诱导扩 增DC的研究，包括用人脐血、骨髓和粒细胞集落刺激因子动员后外周血 中的造血干／祖细胞或单核细胞体外诱导扩增，已获得成功。由于树突状 细胞主要来源于骨髓的CD34+造血干细胞，故从骨髓细胞中分离扩增诱 marrow．derived 导DC更易成功。本研究就小鼠骨髓树突状细胞(bone dendritic 量、时机、孵育时间等进行探究，探索、优化体外诱导和扩增小鼠树突状 细胞的方法，通过形态学观察及流式细胞仪行相对特异性表面标志物检测 以鉴定DC的成熟情况，摸索和印证DC体外培养和扩增的方法，提高DC 的产量和纯度。 DC除了通过特异性肿瘤单克隆抗体(McAb)介导的细胞毒效应，增强 杀伤肿瘤细胞的活性，激活并调控T淋巴细胞的免疫功能，对机体免疫反应 发挥重要的调节作用外，还具有直接杀伤肿瘤的生物学活性。过去多采用 中文摘要 细胞的活性，这些方法虽各具优点，但都存在一定的局限性，本研究采用四 甲基偶氮唑盐(MTI)比色法测定小鼠DC在不同孵育时间、不同效靶比 (E：T)时对胃癌细胞的体外杀伤作用。探讨树突状细胞肿瘤免疫机制， 为临床进一步研究与应用DC进行胃癌的免疫治疗提供佐证。 方法： 选取四周龄615d,鼠，雌雄各半，处死，无菌条件下收集并纯化骨髓 大小、数量、分布及贴壁情况的变化。用流式细胞仪检测培养第7天、第 lO天DC表面标