小鼠诺如病毒分离鉴定-中国试验动物学报.DOC

周传农修改： 英文摘要 — 已修改 正文中的英文书写 — 已顺 图与表的英文 — 已顺 文献的英文书写 — 已顺 ( 小鼠诺如病毒衣壳蛋白(VP1)基因分析 袁文，张谱华，王静，刘香梅，张钰，黄韧 （广东省实验动物重点实验室，广东省实验动物监测所，广州 510） [摘要] 目的 对来自广东（urine norovirus，MNV）病毒的衣壳蛋白（VP1）基因进行测序和序列分析，绘制系统发生树，了解广东地区MNV的分子遗传特征和进化来源。方法 采用RAW264.7细胞对RT-PCR检测为阳性的样本进行病毒分离，通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光试验方法对进行鉴定应用RT-PCR技术针对15株MNV分离株的VP1基因的1626个核苷酸片段进行扩增，将扩增产物连接在pMD18-T 载体后转化到大肠杆菌中进行克隆。通过氨苄青霉素平皿筛选，将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定及序列分析。将这15 株MNV分离株与从GenBank获得的19株MNV参考株进行序列比较分析，基于VP1基因的1626核苷酸片段构建系统发生进化树，一起进行分子流行病学研究。结果 从80个样本中分离到了15株MNV病毒细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光试验MNV分离株的VP1蛋白基因全长均为1626个核苷酸，广东地区15株MNV分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别在89.7100%和94.8100%之间， 15株MNV分离株与其他19株MNV参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别在87.592.9%和92.498.2%之间。进化树分析表明来自设施A和设施D的13株病毒之间的亲缘关系较近，一个。来自设施B 的ZD-1毒株和设施C的ZYY-163毒株与来自广东（K162）、日本（S7-P2、S7-PP3）、韩国（K4）和德国（Berlin/04/06/DE、 Berlin/05/06/DE）一个。结论 遗传进化分析表明广东地区的MNV分离株来源并不相同，来自设施B和设施C的MNV分离株，而来自设施A和设施D的13株MNV分离株可能是本地毒株。 [关键词] 小鼠诺如病毒（MNV）；；遗传进化分析； [中图分类号] S865. 1+ 3；S855.3[文章编号]Isolation and identification of murine norovirus and genetic analysis of its capsid protein gene (VP1) YUAN Wen，ZHANG Pu-hua，WANG Jing，LIU Xiang-mei， ZHAO Wei-bo，ZHANG Yu，HUANG Ren （Guangdong Key Laboratory of Laboratory Animals，Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute, Guangzhou 510, China） [Abstract] Objective To isolate and identify murine norovirus (MNV) from the infected mice breeding in four facilities in Guangdong Province. To illuminate molecular genetic features and evolutionary origin of the MNV isolates by analysing nucleotide sequence of MNV capsid protein (VP1) gene. Methods Mouse macrophage cell line RAW264.7 was used for isolate virus from the cecal contents of the infected mice tested by RT-PCR. Cytopathic effect (CPE) assay, RT-PCR technology, indirect immunofluorescence assay and nucleotide sequencing were performed to identify the MNV isolates. Fragments of 1626 nucleotides including VP1 genes from 15 MNV isolates were amplified by RT-PCR. The PCR products were ligated to pMD18-T vector and cloned to E. coli DH5α cells. By ampic